[發明專利]鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白及其應用

有效

• 申請號: 201410067680.9
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號: CN104211785B
• 公開（公告）日: 2017-01-25
• 發明（設計）人: 李澤君;李國新
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: C07K14/08
• 分類號: C07K14/08;C12N15/70;G01N33/68;A61K39/12;A61P31/14
• 代理公司: 上海序倫律師事務所31276
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，尤其涉及一種鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白及其應用。

背景技術

鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒（Duck?Tembusu?Virus,DTMUV）引起的一種以蛋鴨產蛋下降為主要特征的傳染病。2010年，鴨坦布蘇病毒病在我國南方部分地區首次發生，之后蔓延到全國大部分鴨養殖地區。其主要臨床上表現為高熱、食欲廢絕、產蛋下降甚至停止，死亡率可達5%～10%。該病傳播迅速且發病范圍廣，給我國蛋鴨和種鴨養殖造成了極大經濟損失。

鴨坦布蘇病毒（DTMUV）屬于黃病毒科、黃病毒屬，其基因組為不分節段的單股正鏈RNA，核苷酸長度約為11kb，含有單一的開放閱讀框，編碼結構蛋白（C、PrM和E）和非結構蛋白（NS1,NS2A,NS2B,NS3,NS4A,NS4B和NS5）。對于黃病毒的研究表明，E蛋白是黃病毒主要表面結構蛋白，包含許多與宿主嗜性、宿主細胞膜融合及宿主細胞表面受體結合相關的抗原表位。根據其功能不同，E蛋白分為三個結構域（I，II和III），而成免疫球蛋白樣的第三結構域（EDIII）位于病毒最外層，在介導病毒與宿主受體結合中具有重要的作用，同時也是誘導中和抗體的優勢表位區域。鴨坦布蘇病毒與其他黃病毒一樣，具有相似的E蛋白結構。在黃病毒的研究中，對EDIII的表達和功能研究，對于病毒與宿主細胞的相互作用、以及臨床診斷和亞單位疫苗研究具有重要意義。鴨坦布蘇病毒病是一種新發傳染病，目前，對于該病的診斷缺乏有效的診斷抗原，而且，對于該病的預防也無疫苗可用。

以大腸桿菌為宿主的原核表達系統，由于其繁殖快，成本低等優點而被廣泛使用。然而密碼子對于宿主具有偏嗜性，不同宿主密碼子的使用頻率不同，經常會影響異源基因在宿主中的表達。另外，對于目的蛋白的表達，表達載體的選擇也很重要，選擇合適的表達載體使目的蛋白獲得高效、可溶性的表達，對于目的蛋白后續的研究和應用具有重要意義。

發明內容

本發明要解決目前針對鴨坦布蘇病毒病缺乏有效的診斷抗原和疫苗的技術問題，提供一種鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白，該重組蛋白是根據大腸桿菌偏好性密碼子對鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域的核苷酸序列進行優化后獲得的可溶性重組蛋白，該可溶性重組蛋白不僅可以作為診斷抗原檢測鴨坦布蘇病毒病抗體，而且還可以作為鴨坦布蘇病毒病的亞單位疫苗接種動物誘導產生中和抗體。

此外，還需要提供一種上述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白的應用。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現:

在本發明的一個方面，提供了一種鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白，該重組蛋白具有SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，編碼該重組蛋白的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。

在本發明的另一方面，還提供了一種重組載體，包含：編碼鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域蛋白的基因序列，所述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。優選的，所述編碼鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域蛋白的基因序列是按照大腸桿菌偏好性密碼子進行優化后的核苷酸序列，該優化序列如SEQ?ID?NO.2所示。

優選的，所述重組載體的空載體為pCold-TF原核表達載體，使目的蛋白與可溶性的載體蛋白融合表達，能獲得可溶性的重組蛋白。

在本發明的另一方面，還提供了一種由上述重組載體經表達而制得的鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白。

在本發明的另一方面，還提供了一種診斷鴨坦布蘇病毒病的試劑盒，包含上述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白。

優選的，所述試劑盒還包含ELISA酶標板、酶標二抗、酶底物液，其中酶標二抗為辣根過氧化物酶標記的羊抗鴨二抗。

在本發明的另一方面，還提供了一種抗鴨坦布蘇病毒病疫苗，包含上述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白。

在本發明的另一方面，還提供了一種疫苗組合物，包含：與佐劑或藥用載體混合上述抗鴨坦布蘇病毒病疫苗。

在本發明的另一方面，還提供了一種上述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白在制備診斷鴨坦布蘇病毒病的產品中的應用。

在本發明的另一方面，還提供了一種上述鴨坦布蘇病毒E蛋白第三結構域重組蛋白在制備預防或治療鴨坦布蘇病毒病的疫苗中的應用。