[發(fā)明專利]一種無(wú)菌蠶蟲草的培育方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410067665.4
• 申請(qǐng)日: 2014-02-26
• 公開（公告）號(hào): CN103798058A
• 公開（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李化秀;顧寅鈺;施新琴;李峰;于振誠(chéng);郭光;李智峰;聶磊;趙德安;王璽蘭
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省蠶業(yè)研究所
• 主分類號(hào): A01G1/04
• 分類號(hào): A01G1/04;C05G3/00
• 代理公司: 濟(jì)南金迪知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219
• 代理人: 朱家富

1.一種無(wú)菌蠶蟲草的培育方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將蠶卵經(jīng)消毒后，在無(wú)菌條件下孵育至5齡第1～2天，制得無(wú)菌蠶體；

（2）將蛹蟲草子實(shí)體置于消毒液中消毒2～3min，無(wú)菌水洗凈，取中間部位組織塊切片，將組織片接種于固體培養(yǎng)基中，18℃～25℃黑暗培養(yǎng)7～10天；然后感光培養(yǎng)2～4天，將菌絲接種于液體菌種培養(yǎng)基中，黑暗條件下，每天在恒溫?fù)u床上以200r/min搖1～3小時(shí)，繼續(xù)培養(yǎng)3～7天后得到液體菌種，制得接種菌液；

（3）采用無(wú)菌注射方式將步驟（2）制得的接種菌液接種于步驟（1）制得的無(wú)菌蠶體的尾角、腹足或節(jié)間，每條無(wú)菌蠶體的接種量為0.09～0.11mL，經(jīng)16～20℃無(wú)菌晾干45～80min，正常無(wú)菌飼養(yǎng)2～3天，將僵化的蠶體除沙后，在黑暗條件下，保持濕度80%～90%，溫度18～25℃，培養(yǎng)6～8天，然后感光出草培養(yǎng)25～35天，經(jīng)100℃以下的低溫烘干1～3h，制得無(wú)菌蠶蟲草。

2.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（1）中的消毒，為將蠶卵在用紗布包裹，在75%（體積百分比）的乙醇溶液中浸泡1～2分鐘，轉(zhuǎn)入2%～4%（體積百分比）甲醛溶液浸8～10分鐘，再轉(zhuǎn)入無(wú)水乙醇浸漬1～2分鐘，轉(zhuǎn)入無(wú)菌隔離器中自然晾干。

3.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（1）中的蠶卵為催青至點(diǎn)青期的家蠶卵。

4.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（1）中的無(wú)菌條件下孵育為在無(wú)菌條件下孵化蠶卵后，在無(wú)菌環(huán)境中飼養(yǎng)，飼喂經(jīng)滅菌后的飼料。

5.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（2）中的消毒液為質(zhì)量濃度為0.1%的氯化汞溶液。

6.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（2）中的組織片厚度為0.1mm。

7.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（2）中的接種菌液的菌絲濃度為0.2～0.8mg/ml。

8.如權(quán)利要求1所述的培育方法，其特征在于，所述步驟（3）中的注射方式為采用針頭直徑≤0.3mm的針頭注射。