[發明專利]一種屎腸球菌及其制備方法

有效

• 申請號: 201410067604.8
• 申請日: 2014-02-27
• 公開（公告）號: CN103865846A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發明（設計）人: 潘林福
• 申請（專利權）人: 揚州綠保生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A23K1/16;C12R1/46
• 代理公司: 揚州市錦江專利事務所 32106
• 代理人: 江平

技術領域

本發明涉及微生物領域，具體涉及一種屎腸球菌及其應用。?

背景技術

當前由于抗生素濫用以及超級細菌的出現等等一系列問題，使人類不可回避的面臨由此所造成的嚴重局面，當務之急，必須盡快研發抗生素替代品，為綠色、安全、高效的動物飼料和人類食品生產提供可靠的技術保障。益生素是近20年發展起來的一種新型飼料添加劑，它具有抗生素和酶的功能。益生素可以補充有益菌群，改善消化道菌群平衡，預防和治療菌群失調癥；可以刺激機體免疫系統，提高動物機體免疫能力；能夠參與菌群生存競爭，協助機體消除毒素和代謝產物；可改善機體代謝，補充機體營養成分，促進畜禽生長。?

屎腸球菌(Enterococcus?faecium)是目前農業部令（2013年2045號）動物微生物飼料添加劑欄所允許使用的益生菌種類，研究表明該菌可作為動物微生物飼料添加劑應用，能有效抑制動物消化道致病菌，改善消化道微生態環境；增強動物體的免疫功能。?

發明內容

本發明目的是為了解決當前抗生素的濫用以及超級細菌的出現等等一系列問題，提出一種利于改善動物機體代謝、補充機體營養成分、促進畜禽生長的屎腸球菌L-01。?

本發明提出的屎腸球菌L-01?(Enterococcus?faecium?L-01)于2012年5月30保藏于位于中國武漢大學的中國典型培養物保藏中心，保藏編號是CCTCC?NO：M?2012194。?

本發明還提出以上屎腸球菌L-01的制備方法，即從屠宰的山羊瘤胃中采集菌樣，外采用37±5℃、厭氧、避光的條件進行定向培育，通過瓊脂平板分區反復劃線分離純化后取得屎腸球菌L-01。?

本發明從健康山羊屠宰后的瘤胃分離、純化、培育、鑒定到1株屎腸球菌并保種，可作為動物微生物飼料添加劑應用，能有效抑制動物消化道致病菌，改善消化道微生態環境；增強動物體的免疫功能，并可作為抗生素替代品，可有效解決當前所面臨的嚴重局面。?

????本發明篩選得到的菌株，與中國工業微生物菌種保藏管理中心等國家保種機構現存菌種來源及生物學特性不同。經過中國工業微生物菌種保藏管理中心鑒定，該菌株為屎腸球菌，且在中國工業微生物菌種保藏管理中心進行了遺傳穩定性試驗，證明該菌株性狀可穩定遺傳。在8-12h的酶活力動態變化過程中，α-淀粉酶活力與α-葡萄糖轉苷酶活力均達到峰值并維持在較高水平。?

本菌株分離源自屠宰后的健康山羊瘤胃，其發酵產物作為動物微生物飼料添加劑應用于養殖動物，尤其是對改善反芻動物，其相容性和功效最為理想，此外，對于仔豬消化道微生態環境穩態的建立也具有積極的調控作用。?

附圖說明

圖1為本發明屎腸球菌L-01的菌株菌落照片。?

圖2、圖3分別為本發明屎腸球菌L-01的菌株場發射掃描電鏡照片。?

圖4為本發明屎腸球菌L-01菌株MRS培養基菌體形態照片。?

圖5為本發明屎腸球菌L-01菌株MRS培養基菌落形態照片。?

圖6為39℃淀粉酶（AMS）活力隨時間變化的關系圖。?

圖7為對硝基苯酚的標準曲線圖。?

圖8為58℃α-葡萄糖轉苷酶活力隨時間變化的關系圖。?

圖9為屎腸球菌L-01與相關種的16S?rDNA序列系統發育樹。?

圖10為屎腸球菌L-01與相關種的pheS基因序列系統發育樹。?

具體實施方式

一、菌株的篩選?

1.篩選過程

從飼養的山羊屠宰的瘤胃中采集菌樣，體外采用37±5℃、厭氧、避光的特定條件進行定向培育，通過瓊脂平板分區反復劃線分離純化至單菌株L-01并馴化，研究其形態學及生物學特性。通過瓊脂平板培養觀察菌落特征、電子顯微鏡觀察單菌株形態及相關關鍵酶活力測定。

1.1工作母液的配置：?