[發(fā)明專利]京海黃雞12周齡體重的分子遺傳標(biāo)記及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410067476.7
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號: CN103789445A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張跟喜;唐瑩;王金玉;張濤;謝愷舟;戴國俊;俞亞波
• 申請（專利權(quán)）人: 揚(yáng)州大學(xué)
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 南京知識律師事務(wù)所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及家禽育種領(lǐng)域，具體涉及一種利用單倍型組合提高京海黃雞體重的方法。

背景技術(shù)

生長性狀是肉雞生產(chǎn)中的重要經(jīng)濟(jì)性狀，是反映雞生產(chǎn)水平和雞場經(jīng)濟(jì)效益的重要指標(biāo)，而家禽的生產(chǎn)性狀多為數(shù)量性狀，運(yùn)用候選基因法，鑒定分離出與這些性狀遺傳變異相關(guān)的QTL有利于對家禽經(jīng)濟(jì)性狀的有效選擇。而1個候選基因通常存在多個SNPs位點(diǎn)，如果采用不同的SNP位點(diǎn)進(jìn)行候選基因與性狀間的關(guān)聯(lián)分析，可以彌補(bǔ)單個SNP提供信息量不足的缺點(diǎn)。目前，利用單倍型或單倍型塊來研究QTL與動物生產(chǎn)性能的相關(guān)性是候選基因研究的趨勢之一。

動物胚胎以及成體骨骼肌的發(fā)育均依賴于生肌調(diào)節(jié)因子家族的精準(zhǔn)調(diào)控，該家族基因是骨骼肌組織特異b-HLH轉(zhuǎn)錄因子、激活骨骼肌分化階段特異性基因，并與骨骼肌纖維損傷的修復(fù)和骨骼肌肥大有關(guān)。生肌因子5（Myf5）基因是生肌調(diào)節(jié)因子家族成員之一，其在胚胎發(fā)育時肌細(xì)胞中最早被誘導(dǎo)表達(dá)的因子，其決定著肌衛(wèi)星細(xì)胞是否能啟動成為具有成肌特性的肌肉干細(xì)胞。在肌肉的生長過程中，Myf5基因也起著非常重要的作用，它與肌纖維的數(shù)量和大小均有關(guān)系，并與MRFs家族其他成員相互作用，調(diào)節(jié)彼此間的表達(dá)，最終會引起產(chǎn)肉量的變化，表現(xiàn)為體重的變化。研究Myf5基因?qū)π笄莓a(chǎn)肉力改善有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種利用單倍型組合提高京海黃雞體重的方法，該方法利用Myf5基因的單倍型組合對京海黃雞12周齡體重進(jìn)行標(biāo)記輔助選擇，不受環(huán)境影響。

本發(fā)明公開了Myf5基因作為京海黃雞12周齡體重分子遺傳標(biāo)記的應(yīng)用。

基于上述應(yīng)用的利用單倍型組合提高京海黃雞12周齡體重的方法是：提取待測樣本的雞基因組DNA，經(jīng)序列如SEQ?ID?NO：1-6所示的特異性引物擴(kuò)增得到173、247和150bp的片段，目的片段經(jīng)SSCP分析，凝膠電泳后用銀染顯色，得到DNA的SSCP圖譜，根據(jù)3個圖譜中的帶型篩選基因型分別為圖1中1、9、11所示的個體，也就是H1H5單倍型組合的個體。

本發(fā)明的原理是：針對Myf5基因設(shè)計(jì)3對引物（P1，P2，P3），引物P1擴(kuò)增產(chǎn)物存在6種基因型，引物P2、P3各存在3種基因型，檢測區(qū)域存在8個SNPs位點(diǎn)。測序結(jié)果與Myf5基因原序列（GenBank?ID：NW_003763474.1）比對發(fā)現(xiàn)，這8個位點(diǎn)分別為C967T，C968T，C976T，T998C，C1007T，G1043A，A1313G，G1717A，前7個突變均位于Myf5基因的外顯子1，第8個位于內(nèi)含子1。其中C967T和C968T一起突變造成了編碼氨基酸由絲氨酸到苯丙氨酸的變化,C976T造成了絲氨酸到亮氨酸的突變，其余突變未造成編碼氨基酸的改變。利用PHASE2.1軟件計(jì)算分析單倍型種類及其頻率，其中頻率大于1%的有9種，分別命名為H1～H9。統(tǒng)計(jì)分析表明單倍型組合H1H5體重最高，顯著高于單倍型組合H2H4（P<0.05）。該選擇的效果顯著，檢測方法簡單快捷，且不受外界環(huán)境的影響，可以用于京海黃雞12周齡體重的分子遺傳標(biāo)記。

附圖說明

圖1是Myf5基因擴(kuò)增產(chǎn)物的PCR-SSCP圖譜。P1為引物P1擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)形成的帶型，P2為引物P2擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)形成的的帶型，P3是引物P3擴(kuò)增產(chǎn)物多態(tài)形成的帶型。

圖2是京海黃雞Myf5基因8個SNPs位點(diǎn)的序列比較。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例

1.1實(shí)驗(yàn)動物

隨機(jī)采取江蘇京海禽業(yè)集團(tuán)有限公司同一批次的379只京海黃雞母雞血樣。采用酚氯仿抽提法提取雞基因組DNA，溶于TE，NANODROP1000核酸濃度測定儀測定濃度和純度后-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2引物設(shè)計(jì)與PCR擴(kuò)增

根據(jù)GenBank中已發(fā)表的Myf5基因序列（登錄號為：NW_003763474.1），采用Primer3.0設(shè)計(jì)3對引物。擴(kuò)增產(chǎn)物大小分別為173、247和150bp。引物序列如下：

P1：F：5′-AGATGGAGGTGATGGACAGC-3′(SEQ?ID?NO：1）

R:5′-GGACGTGTTCCTCTTCCTCA-3′(SEQ?ID?NO：2）

P2:F：5′-GCAGCCACTATGAGGGAGAG-3′(SEQ?ID?NO：3）

R:5′-TTACCATCACATCGGAGCAG-3′(SEQ?ID?NO：4）