[發明專利]一種與小麥葉銹病抗性相關的類甜蛋白及其編碼基因與應用

在審

• 申請號: 201410066121.6
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號: CN104862307A
• 公開（公告）日: 2015-08-26
• 發明（設計）人: 王海燕;劉大群;高琳
• 申請（專利權）人: 河北農業大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N15/56;C12N9/24
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于克隆與小麥葉銹病抗性相關的類甜蛋白基因的引物序列，是由序列表中引物TcLr19PR5_F和TcLr19PR5_R核苷酸序列組成的引物對。

2.根據權利要求1所述的引物序列在TcLr19小麥中克隆類甜蛋白基因TcLr19PR5，采用的擴增反應條件特征在于：所述的PCR反應體系包含100?ng模板cDNA，?10μmol/L?引物?1μL，?10?mmol/L?dNTP??0.5μL，1U?Taq?DNA聚合酶?0.3μL，10×PCR緩沖液2.5μL，加入滅菌ddH₂O至25μL；PCR反應程序為：94℃預變性1?min；94℃變性30?s，62℃退火1?min，72℃延伸?2?min，35個循環；72℃延伸10?min。

3.根據權利要求2所述，明確獲得的類甜蛋白基因的結構特征：該序列不含內含子，開放閱讀框(open?reading?frame,?ORF)長516?bp，編碼171個氨基酸殘基，屬于糖苷水解酶64家族類甜蛋白超家族(glycoside?hydrolases?of?family?64-thaumatin-like?proteins,?GH64-TLP-SF)，具有一個甜蛋白保守結構域(thaumatin,?THN)，，與小麥(Triticum?aestivum?Linn.)PR5蛋白相似性為92%，與燕麥(Avena?sativa)、高粱(Sorghum?bicolor)?、玉米(Zea?mays)和大麥(Hordeum?vulgare)等植物PR5蛋白的氨基酸序列相似性在80%左右。

4.根據權利要求3所述，明確TcLr19PR5基因在小麥中的時間和空間表達模式；特征為：實時熒光定量PCR分析表明，在接種葉銹菌后不同時間點，該基因在非親和組合中表達量比親和組合中高，表明TcLr19PR5基因的表達受小麥葉銹菌誘導，且莖部表達量高于葉部和根部表達量，同時明確其表達受脫落酸(abscisic?acid,?ABA)和水楊酸(salicylic?acid,?SA)逆境信號分子的誘導。

5.根據權利要求3和4，TcLr19PR5基因可能在小麥抗葉銹病防御反應中發揮作用，將為深入探討小麥與葉銹菌互作的分子機理提供基礎資料，為培育抗葉銹病小麥品種提供理論依據。