[發明專利]用于骨髓活檢的固定-脫鈣液及骨髓活檢組織石蠟切片方法

在審

• 申請號: 201410065474.4
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號: CN103994913A
• 公開（公告）日: 2014-08-20
• 發明（設計）人: 夏成青;陳紅梅
• 申請（專利權）人: 武漢艾迪康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: G01N1/36
• 分類號: G01N1/36;G01N1/28;G01N1/30
• 代理公司: 杭州裕陽專利事務所(普通合伙) 33221
• 代理人: 應圣義

技術領域

本發明涉及用于骨髓活檢的固定-脫鈣液及骨髓活檢組織石蠟切片方法。

背景技術

骨髓活體組織檢查術簡稱骨髓活檢，就是用一個特制的穿刺針取一小塊大約1.0-2.0厘米長的圓柱形骨髓組織來作病理學檢查。操作方法與骨髓涂片穿刺術完全相同，骨髓活檢保持了完整的骨髓組織結構，能很好地反映骨髓增生程度，比較全面地了解骨髓病態特點，尤其是髓外腫瘤的骨髓浸潤。

現在常采用石蠟切片技術制作骨髓活檢組織，主要包括以下步驟：骨髓樣本組織的固定、脫鈣、脫水、包埋、切片、HE染色及按疾病診斷需要進行免疫組織化學染色。影響骨髓石蠟切片的質量是多方面的，其中骨髓組織的固定、脫鈣、染色等關鍵環節處理不當，均可影響切片的質量，從而影響醫生對病理學診斷結果地判斷。

制作高質量的骨髓切片最重要的環節是標本組織的固定和脫鈣。如果骨髓標本組織未被充分固定，那么在后續的環節中標本組織形態結構及細胞內各種成分就會被破壞。如果標本組織脫鈣不完全，將無法切出完整的石蠟切片，且在染色過程中容易掉片，容易人為地造成組織結構不完整。

現在常用的骨髓標本固定液有10%的中性福爾馬林、Bouin液或LowyFMA液。常用的脫鈣液有無機酸或EDTA等溫和脫鈣液。使用10%的中性福爾馬林固定的時間為16-24小時，因為如果固定時間太短，可能導致不均勻的免疫反應，陳舊組織較容易產生色素沉淀。Bouin液包含具有強烈刺激性氣味的冰醋酸，檢驗員在使用這類固定液時，呼吸系統會受到強烈地刺激。LowyFMA液中包含屬于易爆試劑的苦味酸，操作時要非常小心，使用這類固定液存在一定的安全隱患。使用Bouin液和LowyFMA液固定標本組織，作用時間也需16-24小時。

現在常用的脫鈣液有兩類：一種是無機酸，這類脫鈣液的脫鈣速度較快，一般骨髓活檢組織脫鈣2小時即可，但可能會導致許多抗原的丟失，對免疫組織化學染色有明顯影響。另一種為溫和脫鈣液，如EDTA等，但脫鈣速度慢，需要過夜。?

在現有的骨髓活檢石蠟切片方法中樣本組織的固定和脫鈣環節是分開兩個步驟進行的，即先用固定液對骨髓標本固定，然后固定液更換成脫鈣液完成樣本脫鈣。用固定液在室溫條件下完成樣本的固定需要16-24小時，用脫鈣液完成樣本的脫鈣需要18-24小時。這樣一來，整個固定和脫鈣大約需要花費24-48小時。而這樣長時間的骨髓樣本切片制作過程，直接導致給出檢測診斷結果的時間增加，影響治療的及時性。再者，現有的切片方法中固定和脫鈣是分開的兩個步驟，且每個步驟都需要嚴格控制時間，一旦固定或脫鈣的處理時間不準確就會直接影響到后續石蠟切片的效果，因此檢驗員必須在檢驗過程中騰出時間去更換工作液（從固定液更換為脫鈣液），這樣的工作量是很大的。

另一方面，為了促進健康服務業務，將人員、配備要求較高的檢驗業務項目交給第三方獨立醫學實驗室已經成為趨勢。這樣將分散在各大醫院的樣本集中到獨立醫學實驗室完成各種檢驗項目。醫院收集病人的樣本并轉送到第三方獨立醫學實驗室，轉送時間少則1天，多則2-3天?，F有的骨髓活檢方法需要中途更換工作液，因此現有方法就不太適合采用第三方獨立實驗室來完成骨髓活檢項目。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的在于提供了一種用于骨髓活檢的樣本固定-脫鈣液，包括40%的甲醛、EDTA和緩沖液，pH值為7.0-7.2。

進一步地，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液。

進一步地，以1000ml計，包括：

0.1M?磷酸鹽緩沖液?????????900ml；

40%的甲醛?????????????????100ml；

EDTA??????????????????????150克；

pH值為7.0-7.2。

本發明還提供一種骨髓活檢組織石蠟切片的方法，包括以下步驟：骨髓樣本用固定-脫鈣液進行固定和脫鈣、流水沖洗、脫水、浸蠟、包埋、切片、?HE染色和/或免疫組織化學染色，其特征在于，所述的固定-脫鈣液包括40%的甲醛、EDTA和緩沖液，pH值為7.0-7.2。

進一步地，以1000ml計，包括：

0.1M?磷酸鹽緩沖液?????????900ml；

40%的甲醛?????????????????100ml；

EDTA??????????????????????150克；

pH值為7.0-7.2。

進一步地，樣本：固定-脫鈣液的體積比等于或大于1：10。

進一步地，固定-脫鈣的時間為20-72小時。