[發明專利]一種西瓜組培苗試管微嫁接方法

有效

• 申請號: 201410065302.7
• 申請日: 2014-02-26
• 公開（公告）號: CN103782811A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 張娜;彭定祥;孫玉宏;汪波;劉立軍;施先鋒;曾紅霞;陽永學;程維舜;任儉;李煜華;湯謐
• 申請（專利權）人: 武漢市農業科學研究所
• 主分類號: A01G1/06
• 分類號: A01G1/06
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 李劍

技術領域

本發明涉及嫁接技術領域，更具體涉及一種西瓜組培苗試管微嫁接方法。方法易行、操作簡便、成活率高，應用范圍廣泛。為嫁接技術的應用提供了新途徑，為嫁接相關理論研究提供了科學的研究系統。

背景技術

西瓜[Citrullus?Lanatus（Thunb.）Matsum.?et?Nakai]葫蘆科，西瓜屬，一年生蔓生草本植物。原產非洲，是世界五大水果之一，在我國國民經濟中占有重要地位。嫁接是目前解決西瓜枯萎病等土傳病害的唯一有效方法，但嫁接體發育過程復雜，易受環境條件的影響，缺少理想的研究系統，造成嫁接相關理論研究滯后。同時，西瓜離體培養再生植株生根不理想，且生根后的移栽成活率也不高。

微嫁接是一種在無菌條件下將砧木與接穗進行嫁接、培養的技術，是植物組織培養與嫁接技術的結合，具有周期短、占用空間少、見效快、研究結果可靠性強、嫁接體生長條件可人為控制等優點。（1）它可作為保存特殊的育種中間材料的方法，體細胞再生植株、轉基因植株、莖尖培養植株等無菌苗直接定植成活率低，在一定程度上制約了遠緣雜交、生物技術和細胞工程在植物遺傳改良等方面的應用，微嫁接技術可改善這一狀況。如河北農業大學王彥霞等研究出對大規模保存棉花遺傳分離群體、稀有種質資源和遠緣雜交不育材料具有特殊意義的高效嫁接技術—“接合法”，利用此技術大規模嫁接棉花轉基因植株、遺傳分離群體、常規棉株等。（2）也可培育屬間嫁接雜種(嵌合體)?，如許多親緣關系較遠的屬間植物，雖不能進行有性雜交，但可以通過相互嫁接獲得采用有性雜交無法獲得的遠緣雜種，栽培砧木接穗親和性好的遠緣嫁接雜種，可以提高果實的品質和產量等。花卉市場上各種各樣的“藝菊”，一般均采用黃蒿、青蒿、大籽蒿、蘄艾等作砧木嫁接栽培菊培養而成。（3）還可利用嫁接產生的可遺傳變異育種，雖然從理論上講嫁接是無性繁殖，不會引起接穗后代性狀的改變，但人們發現某些嫁接可以引起可遺傳性變異。例如在染色體數不同的茄科植物的屬間嫁接中觀察到染色體的性狀有很大的變異：生殖過程的破壞，性細胞內染色體數量的改變，染色體形狀的改變，染色體不同染色程度和染色體易位的出現等。（4）可為嫁接相關基礎理論研究提供科學的研究系統。

在西瓜作物上開展試管微嫁接技術研究目前尚未見報道。本發明可在一定程度上解決西瓜組培中目前存在的再生植株移栽成活率低的問題，為嫁接技術的應用提供了新的途徑，同時為西瓜嫁接相關理論研究、品種改良、細胞工程等研究提供技術保證，在西瓜嫁接苗生產上也具有重要意義。

發明內容

本發明的目的在于提出了一種西瓜組培苗試管微嫁接方法，以無菌種子發芽幼苗為砧木，以西瓜組培苗為接穗的嫁接方法，方法易行、操作簡便、成活率高，應用范圍廣泛。

為了實現上述的目的，本發明采用以下技術方案：

一種西瓜組培苗試管微嫁接方法，其步驟是：?

A、砧木準備，西瓜或葫蘆或南瓜種子經表面消毒，然后接種于高溫高壓滅菌的MS固體培養基中培養，砧木苗齡15天-20天、兩片子葉平展且具一片真葉時可用于嫁接；

B、接穗準備，在伸長培養基上生長至25天-30天左右、長至1.5?cm-2?cm的長勢一致的組培苗做接穗；

C、嫁接，將砧木子葉及其以上部分切去，并將其下胚軸中間縱切成切口，備用；將接穗下端斜切出“V”形傷口，備用；將接穗插于砧木切口，使砧木和接穗的形成層緊密接觸；

D、嫁接體培養，將嫁接體置于高壓滅菌的固體培養基中，用封口膜封口保濕，在28?℃條件下培養，濕度要求95%以上；

E、嫁接苗移栽，嫁接后25?天左右，成活的嫁接苗于馴化室馴化3天-4天后，移栽于育苗基質中培養至具4?片葉片可移栽到大田，按常規栽培方式管理。

所述的砧木準備，西瓜或葫蘆或南瓜種子表面消毒處理：西瓜或葫蘆或南瓜種子去殼后，在超凈工作臺上進行滅菌處理：于5％的次氯酸鈉溶液中浸泡5?min，用無菌水徹底清洗干凈，而后以無菌濾紙吸干種子表面水分；

培養環境為：溫度26℃，照度2500?lux-3000?lux、每日16小時光照、8?小時黑暗條件下培養。

所述的嫁接苗移栽中，嫁接后25?d左右，成活的嫁接苗于馴化室打開封口膜馴化，白天溫度22-25℃，夜晚溫度20?℃，3天-4天后，用鑷子將再生苗從三角瓶中取出，洗凈根部培養基，盡量不傷及根毛，而后移栽到已滅菌的蛭石營養缽中，溫度保持在25℃，待植株緩苗后具4?片葉片時可移栽到大田，按常規栽培方式管理；

所述的馴化室為日光溫室。