[發(fā)明專利]豬霍亂沙門氏菌免疫膠體金快速檢測試紙條

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410065283.8
• 申請日: 2014-02-25
• 公開（公告）號: CN103941006A
• 公開（公告）日: 2014-07-23
• 發(fā)明（設計）人: 劉箐;劉程
• 申請（專利權）人: 上海理工大學
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

技術領域

本發(fā)明涉及一種免疫膠體金檢測試紙條，屬于生物檢測領域。?

背景技術

豬霍亂沙門氏菌（Shigella?boydii）屬于志賀氏菌C群，是一種重要的食源性致病菌，可通過受污染的肉、蛋、魚及其制品等動物性產品，瓜子仁等進入人體，引起發(fā)熱、腹痛、里急后重，有時表現為全身中毒癥狀為中毒性痢疾，治療不徹底轉為慢性。?

目前豬霍亂沙門氏菌的檢測主要依賴于國標所規(guī)定的生化鑒定，其缺點是操作繁瑣、檢測周期較長，無法適應大量的樣品篩查。免疫學檢測是近年來出現的最快速、準確、穩(wěn)定的快速檢測手段，但國內外目前尚無可運用于檢測實踐的快速檢測產品，該專利以豬霍亂沙門氏菌為檢測靶標，所要求保護的技術涉及豬霍亂沙門氏菌免疫膠體金快速檢測試紙條。?

發(fā)明內容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種豬霍亂沙門氏菌免疫膠體金快速檢測試紙條，具有：依次連接的樣品墊、金標墊、NC膜和吸收墊，其中，由保藏號為CGMCCNo.7710的雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體Mab05-D10作為金標抗體偶聯膠體金并噴涂于金標墊上，由?保藏號為CGMCCNo.7712的雜交瘤細胞株產生的單克隆抗體Mab05-F10作為檢測抗體并噴涂于NC膜上形成檢測線。?

另外，本發(fā)明還提供了豬霍亂沙門氏菌免疫膠體金快速檢測試紙條在檢測食品豬霍亂沙門氏菌中的應用。?

發(fā)明作用與效果?

根據本發(fā)明的豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條，由于采用了新篩選的配對單克隆抗體分別噴涂金標墊和檢測線，實驗結果顯示本發(fā)明的試紙條對豬霍亂沙門氏菌的檢測特異性和靈敏性均較高。?

附圖說明

圖1是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的單抗SDS-PAGE電泳圖；?

圖2是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的各抗體偶聯膠體金pH結果；?

圖3是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的各抗體偶聯膠體金結合量結果；?

圖4是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的各抗體組合配對結果；?

圖5是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的膠體金試紙條靈敏度結果；?

圖6是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙?條的膠體金試紙條交叉反應結果；?

圖7是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的膠體金試紙條模擬帶菌實驗結果；?

圖8是本發(fā)明實施例中豬霍亂沙門氏菌的免疫膠體金檢測試紙條的結構示意圖。?

保藏信息：?

1.分泌豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體Mab05-D10的雜交瘤細胞株抗豬霍亂沙門氏菌（Salmonella?choleraesuis）雜交瘤細胞株，于2013年06月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研究所，郵政編碼:100101。?

保藏號：CGMCCNo.7710。?

2.分泌豬霍亂沙門氏菌單克隆抗體Mab05-F10的雜交瘤細胞株抗豬霍亂沙門氏菌（Salmonella?choleraesuis）雜交瘤細胞株，于2013年06月03日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號,中國科學院微生物研究所,郵政編碼:100101?

保藏號：CGMCCNo.7712。?

具體實施方式

以下結合附圖介紹本發(fā)明的具體實施方式：?

首先介紹本發(fā)明實施例中所使用的試劑與儀器：?

主要試劑?

弗氏完全佐劑和弗氏不完全佐劑、PEG、TWEEN-20Sigma；BSA購于上海世澤生物科技有限公司；膠體金溶液購于上海金標生物科技有限公司；硝酸纖維素膜(NC膜)135S?Millipore；羊抗鼠、HRP-羊抗鼠、羊抗兔購于上海生工生物工程股份有限公司；單克隆抗體亞型鑒定試劑盒購于ZYMEDCat：90-6550;Lot.60907259。本發(fā)明中用于做交叉反應實驗的菌株均可通過商業(yè)途徑獲得。?

主要儀器?