[發(fā)明專利]一種測定杭白芍花粉活力的方法

有效

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• 申請日: 2014-02-25
• 公開（公告）號: CN103837534A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設計）人: 夏宜平;張佳平;吳昀;李丹青;王冠群;阮婷立
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: G01N21/84
• 分類號: G01N21/84
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發(fā)明涉及植物花粉活力測定領域，尤其涉及一種測定杭白芍花粉活力的方法。

背景技術

芍藥是中國傳統(tǒng)花卉，栽培歷史已近4000年，早在《詩經·鄭風》中便有記載：“維士與女，伊其相謔，贈之以勺藥”。芍藥被譽為“花相”，和“花王”牡丹相齊名，具有很好的觀賞價值和藥用價值。芍藥性喜光照和冷涼，不耐高溫和潮濕，故我國華北地區(qū)的菏澤、洛陽等地是芍藥、牡丹之鄉(xiāng)，觀賞品種眾多，花型、花色、株型豐富多彩，可廣泛用于花境、盆栽或切花觀賞。

浙江省因氣候濕熱，本土觀賞芍藥品種培育幾乎為零，即使引進北方品種，也多因氣候不適及病蟲害嚴重導致觀賞效果大打折扣。但浙江省自古便有種植藥用芍藥的記載，如現(xiàn)今的金華市磐安縣等地生產的杭白芍屬于著名的中藥材“浙八味”之一，其根狀莖品質好，具備補血柔肝、平肝止痛、斂陰收汗等功效；杭白芍的花朵為紫紅、粉紅、粉白或純白色，也具備很好的觀賞價值；同時，杭白芍在浙江本地栽培歷史悠久，對浙江省的濕熱氣候具一定的適應性。

傳統(tǒng)觀賞芍藥很多品種的花型極度重瓣，雄蕊多瓣化，無花藥，更無花粉；也有部分品種具備花藥，但花粉量很少，這些都為利用人工雜交授粉培育新品種帶來阻礙。相比較而言，杭白芍在各方面形態(tài)特征和生態(tài)習性上更接近芍藥的野生原種。例如，因其根狀莖長期供作藥用，花型的篩選多不被重視，多為單瓣型或荷花型，雄蕊和花藥清晰，花粉量極大，是很好的父本材料。因此，將藥用杭白芍作為父本，北方觀賞芍藥品種作為母本，有望培育出既具備良好的觀賞價值、又能夠適應浙江省濕熱氣候的觀賞芍藥新品種，從而解決浙江地區(qū)觀賞芍藥品種極度匱乏的窘狀。

具較高花粉生活力，是選擇父本的重要指標。杭白芍的花粉活力不詳，有關其測量工作至今未有報道。因此，建立一套有效測定杭白芍花粉活力測定的方法，可為浙江杭白芍和北方觀賞芍藥的雜交育種工作帶來很大的促進效應。

目前對于花粉活力的測定主要有3類方法，分別為花粉染色法、田間授粉法、花粉離體萌發(fā)法。花粉染色法是使用化學試劑對花粉進行染色，根據(jù)染色后花粉顏色的深淺判斷活力狀況，方法快速、簡便，主要有K2-KI染色法、醋酸洋紅染色法、TTC染色法等。在《芍藥花粉生活力測定與雜交親本選擇初步研究》、《芍藥花粉活力測定方法的研究》、《芍藥花粉活力和柱頭可授性的研究》、《長期儲藏芍藥花粉生活力測定方法研究》等文獻中，便已記載利用染色法來測定不同花型觀賞芍藥品種的花粉活力。但能夠被染色的花粉卻未必能夠萌發(fā)，不一定會伸出花粉管，因此能夠被染色卻又無法生出花粉管的花粉，在雜交授粉后也未必能夠受精結實，故染色法測定的花粉活力往往偏高。田間授粉法是直接在田間進行雜交育種實驗，待果實成熟后計算結實率。該方法最為原始、直接和可靠，但也最為費時費工，受季節(jié)和天氣影響較大，難以滿足培育新品種的迫切需求。

人工給予花粉萌發(fā)的條件，讓其能夠生長花粉管，根據(jù)萌發(fā)比率來測定花粉活力，是可靠、便捷的方法，這就是花粉的離體萌發(fā)法。已多有論文報道利用離體萌發(fā)法來測量北方觀賞芍藥品種的花粉活力，如《長期儲藏芍藥花粉生活力測定方法研究》、《不同花型芍藥的花粉生活力測定和比較研究》、《培養(yǎng)基成分對芍藥花粉萌發(fā)及花粉管生長的影響》、《三種貯藏溫度條件下芍藥花粉的儲藏特性》、《不同條件下芍藥花粉的貯藏壽命》、《芍藥花粉超低溫保存4年后的生活力檢測》、《芍藥花粉離體萌發(fā)培養(yǎng)基組分的優(yōu)化》等。這些報道涉及到培養(yǎng)基的固態(tài)或液態(tài)形式、不同的成分配比等，但研究材料基本都是北方的觀賞芍藥品種，有關南方地區(qū)藥用型芍藥的花粉活力報道從未出現(xiàn)。

申請人通過花粉活力觀測的實踐發(fā)現(xiàn)，杭白芍花粉萌發(fā)的培養(yǎng)基成分配比和有效觀測時間等，與傳統(tǒng)的觀賞芍藥品種相比具有差異，且花粉在培養(yǎng)過程中存在著較為嚴重的下陷現(xiàn)象，這在以往的報道中未見到涉及。因此，建立一套適合杭白芍花粉活力測定的科學方法，具顯著的理論和實踐意義，可更好的推動浙江本土的藥用杭白芍與北方觀賞芍藥品種的雜交育種工作，以求能夠早日獲得具備自主知識產權和浙江地域特色的觀賞芍藥新品種。

發(fā)明內容

本發(fā)明提供了一種測定杭白芍花粉活力的方法，可以快速、準確地測定杭白芍的花粉活力。

一種測定杭白芍花粉活力的方法，包括：收集杭白芍的花粉；將所述的花粉置于培養(yǎng)基的表面進行離體培養(yǎng)；離體培養(yǎng)結束后統(tǒng)計花粉萌發(fā)率；

所述培養(yǎng)基的組成為：蔗糖80～150g/L，硼酸15～30mg/L，瓊脂8～10g/L；

所述離體培養(yǎng)的時間為2.5～3.5h。