[發明專利]O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝膠佐劑

無效

• 申請號: 201410063148.X
• 申請日: 2014-02-25
• 公開（公告）號: CN103751779A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 王霄旸;王昊欣;張可煜;薛飛群;張麗芳;費陳忠;王米
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院上海獸醫研究所
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61K9/06;A61P31/14;A61K39/135
• 代理公司: 江蘇永衡昭輝律師事務所 32250
• 代理人: 王斌

技術領域

本發明涉及一種O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝膠佐劑，屬于藥劑領域。

背景技術

泊洛沙姆是一類由聚氧乙烯（PEO）、聚氧丙烯（PPO）組成的PEO-PPO-PEO型非離子三嵌段共聚物，已被美國和歐洲藥典收錄，已注冊的商品名有Pluronic，Synperonic或Tetronic。當泊洛沙姆水溶液的濃度處于某一臨界值之上之后，隨著溫度的上升，表現出溶膠-凝膠（低溫溶膠-凝膠邊界）和凝膠-溶膠（高溫凝膠-溶膠邊界）的轉變，凝膠相在兩臨界轉變溫度之間出現，轉變溫度依聚合物組成和濃度而異。

泊洛沙姆溫敏凝膠具有很多優點，包括良好的生物相容性、順應性和緩控釋能力，和較高的安全性，泊洛沙姆188的急性毒性試驗表明其LD50（小鼠，iv）達到1g/kg，大鼠為7.5g/kg，對家兔進行為期14天的靜脈注射（0.5g/kg·d）未見明顯不良反應。溫度敏感原位凝膠給藥體系經液體形式注射，在注射部位形成藥物儲庫，達到緩慢釋放藥物的目的。現有研究多應用于藥物制劑，滴眼劑，栓劑，凝膠劑等，在生物制品上的應用報道較少，尤其是獸醫上應用目前國內未見報道。

近年來，我國在多肽類抗原藥物的研究有了較大的發展，多肽疫苗是按照病原體抗原基因中已知或預測的某段抗原表位的氨基酸序列，通過化學合成技術制備的疫苗。多肽疫苗由于完全是合成的，不存在毒力回升或滅活不全的問題。由于多肽疫苗價廉、安全、特異性強、容易保存和應用的優點，越來越受到重視，但也因其免疫原性差、功效低以及半衰期短等不足影響了免疫效果。Freund等首次報道油乳佐劑具有增強疫苗免疫活性的作用，有人發現礦物油制成的佐劑可刺激機體產生更高的抗體水平，其中使用較多的是弗氏完全佐劑(FCA)和弗氏不完全佐劑(FIA)。弗氏完全佐劑是礦物油和乳化劑形成W/O乳液后，再加入滅活的分支桿菌；弗氏不完全佐劑是在弗氏完全佐劑中未加分支桿菌成分。兩種佐劑因具有高度活性被應用于科研工作中，但其較大的毒副反應（包括潰瘍、肉芽腫、發熱等）限制了其在臨床上的應用；AS02佐劑是含有MPL和QS-21的乳劑，可誘導強烈的抗體應答、Th1型和CTL應答。臨床試驗表明，AS02佐劑在結核、乙肝、癌癥、瘧疾和HIV疫苗中的主要副反應包括全身寒戰、肌痛、頭痛和局部疼痛，而且在瘧疾疫苗的臨床試驗中發現對兒童可產生良好的持續性抗體應答。整體而言，油乳佐劑雖然具有增強疫苗免疫活性的功能，但毒副作用大，對機體的刺激性強，容易引起炎癥反應及其他不良反應，需要改善。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝膠佐劑，具有高的免疫性性能及具有良好的緩慢釋放性能。

為解決上述技術問題，本發明是這樣實現的：

一種O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝膠佐劑，其特征在于包括以下組份：

泊洛沙姆407??19～23g

泊洛沙姆188??1～8g

水???????????加至100mL。

制備方法如下：稱量去離子水，將泊洛沙姆407與泊洛沙姆188加入去離子水適量，4℃靜置24h，加入去離子水至所需比例，臨用前，添加O型口蹄疫多肽抗原，使其濃度達到50μg/mL，搖勻。

1、本發明申請采用泊洛沙姆作為疫苗佐劑，具有較好的生物相容性及安全性，將兩種不同規格的泊洛沙姆進行配比，調節凝膠的膠凝溫度和粘度，可以產生不同程度的免疫效果，試驗中發現，粘度較高的高配比佐劑激發的免疫效果更好。采用冷溶法制備泊洛沙姆溫敏凝膠，通過調整泊洛沙姆407和泊洛沙姆188用量比例控制其穩定性和膠凝溫度，獲得膠凝溫度為33.0±2.0℃的泊洛沙姆溫敏凝膠溶液；

2、建立無膜溶出模型，采用測重法對泊洛沙姆溫敏凝膠的體外溶蝕情況進行檢測，并采用BCA蛋白濃度檢測試劑盒對泊洛沙姆溫敏凝膠的體外多肽釋放情況進行測定，結果顯示，在8h時的蛋白釋放度已達到全部蛋白水平的90%。

3、將泊洛沙姆溫敏凝膠包裹O型口蹄疫多肽疫苗，對Wistar大鼠進行免疫，于3-8周采用ELISA檢測免疫后抗體產生情況，抗體效價最高能夠達到2⁹，而商品化油佐劑對照組為2¹⁰。

總體而言，本申請制備了O型口蹄疫多肽的泊洛沙姆凝膠佐劑，延長了泊洛沙姆在體內的多肽釋放時間、提高了O型口蹄疫多肽疫苗的免疫效價。

附圖說明