[發(fā)明專利]小葉丁香成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410062251.2
• 申請(qǐng)日: 2014-02-24
• 公開（公告）號(hào): CN103766223A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁艷;安鳳霞;高美玲;范震宇;朱琨;陳陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 齊齊哈爾大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109
• 代理人: 牟永林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種愈傷組織培養(yǎng)方法，尤其涉及一種小葉丁香成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)

小葉丁香為木犀科丁香屬植物，北方園林綠化中優(yōu)良的花灌木，枝條柔細(xì)，樹姿秀麗，花色鮮艷，一年二度開花，解決了綠化中夏秋無(wú)花的現(xiàn)狀，為園林中優(yōu)良的花灌木。小葉丁香是雅俗共賞的觀賞植物，除用以露植在庭院、園圃外，也可用以盆栽擺設(shè)在書室、廳堂，或者作為切花插瓶，風(fēng)彩秀麗，清艷宜人。同時(shí)小葉丁香具有重要的藥用價(jià)值。小葉丁香的愈傷組織誘導(dǎo)對(duì)于植株的再生是一個(gè)重要的階段，較高的愈傷組織誘導(dǎo)率對(duì)于后期愈傷組織的分化奠定良好的基礎(chǔ)，如何獲得較高的愈傷組織誘導(dǎo)率與激素的種類和濃度以及培養(yǎng)條件有密切的關(guān)系。

愈傷組織培養(yǎng)可用于研究植物生長(zhǎng)發(fā)育及器官分化的機(jī)制、遺傳變異規(guī)律，也可用于體胚途徑的人工種子規(guī)?；a(chǎn)，或細(xì)胞培養(yǎng)篩選工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)藥生產(chǎn)上有用的無(wú)性系等。實(shí)踐證明，愈傷組織培養(yǎng)不僅是一種植物快繁的新手段，同時(shí)也是植物改良，種質(zhì)保存和有用化合物生產(chǎn)的理想途徑。木本植物外植體污染率比較高，并且木本植物愈傷組織的誘導(dǎo)具有一定的困難。

現(xiàn)有技術(shù)中，小葉丁香組織培養(yǎng)研究較少，個(gè)別研究?jī)?nèi)容主要集中在外植體選擇、生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)配比和培養(yǎng)基配方等領(lǐng)域，外植體主要是利用葉片、莖段、根尖來(lái)誘導(dǎo)愈傷組織，其污染率高、誘導(dǎo)率低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決利用莖段、葉片、根尖誘導(dǎo)愈傷組織污染率高、誘導(dǎo)率低的問題，提供小葉丁香成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)方法。

本發(fā)明的小葉丁香成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)方法，通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的：

一、外植體消毒接種：取小葉丁香成熟種子，去除種翅后在流水下沖洗10～14小時(shí)，然后用質(zhì)量百分含量為70%～75%的酒精消毒25s～35s，用無(wú)菌水沖洗3～5次，再用質(zhì)量百分含量為1%～3%的NaClO消毒25min～35min，用無(wú)菌水沖洗3～5次，超凈條件下先從種子中間切開，去掉胚根部，取出合子胚并將兩片子葉分離后待用；

二、愈傷組織的誘導(dǎo)：將步驟一處理后的合子胚采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，于溫度為23℃～25℃、濕度為60%～70%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)，其中MS培養(yǎng)基含1mg/L的6-BA、lmg/L的NAA、質(zhì)量百分含量為3%的蔗糖和質(zhì)量百分含量為0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.7～5.8。

本發(fā)明的有益效果：

1、本發(fā)明公開了一種小葉丁香成熟合子胚外植體的愈傷組織的誘導(dǎo)方法，本發(fā)明的誘導(dǎo)方法由于采用MS培養(yǎng)基并添加植物生長(zhǎng)素類NAA和細(xì)胞分裂素類6-BA，愈傷組織誘導(dǎo)率高；

2、本發(fā)明針對(duì)小葉丁香成熟胚外植體有明確的培養(yǎng)基激素組合及培養(yǎng)條件，以及對(duì)愈傷組織的最佳的外植體消毒接種方式進(jìn)行了闡述，本發(fā)明選取的成熟胚相對(duì)其他外植體具有保存期長(zhǎng)、材料豐富且不受季節(jié)、植物發(fā)育時(shí)期等因素限制、取材方便、操作簡(jiǎn)單、數(shù)量多等優(yōu)點(diǎn)，因此采用小葉丁香成熟胚作為外植體更利于開展小葉丁香高效再生體系及相關(guān)的研究；

3、本發(fā)明克服了莖段、葉片、根尖誘導(dǎo)愈傷組織高污染率、低誘導(dǎo)率及方法存在的缺陷，本發(fā)明外植體采集時(shí)期集中，污染率極低控制在1%以內(nèi)，小葉丁香愈傷組織的誘導(dǎo)率高，均在75%以上，達(dá)到了較好的誘導(dǎo)效果。

附圖說(shuō)明

圖1是實(shí)施例一接種到培養(yǎng)基上的小葉丁香合子胚圖；

圖2是實(shí)施例一在小葉丁香成熟合子胚的子葉和胚軸處長(zhǎng)出的愈傷組織圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明技術(shù)方案不局限于以下所列舉具體實(shí)施方式，還包括各具體實(shí)施方式間的任意組合。

具體實(shí)施方式一：本實(shí)施方式小葉丁香成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)方法，按以下步驟進(jìn)行：

一、外植體消毒接種：取小葉丁香成熟種子，去除種翅后在流水下沖洗10～14小時(shí)，然后用質(zhì)量百分含量為70%～75%的酒精消毒25s～35s，用無(wú)菌水沖洗3～5次，再用質(zhì)量百分含量為1%～3%的NaClO消毒25min～35min，用無(wú)菌水沖洗3～5次，超凈條件下先從種子中間切開，去掉胚根部，取出合子胚并將兩片子葉分離后待用；

二、愈傷組織的誘導(dǎo)：將步驟一處理后的合子胚采用MS培養(yǎng)基進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)，于溫度為23℃～25℃、濕度為60%～70%的培養(yǎng)條件下進(jìn)行暗培養(yǎng)，其中MS培養(yǎng)基含1mg/L的6-BA、lmg/L的NAA、質(zhì)量百分含量為3%的蔗糖和質(zhì)量百分含量為0.7%的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5.7～5.8。

本實(shí)施方式的有益效果：