[發明專利]一種用于評估穿心蓮抗菌活性的方法

有效

• 申請號: 201410060351.1
• 申請日: 2014-02-21
• 公開（公告）號: CN103792259A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 王伽伯;王艷輝;肖小河;李碩;房吉祥
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三〇二醫院
• 主分類號: G01N25/20
• 分類號: G01N25/20
• 代理公司: 北京安信方達知識產權代理有限公司 11262
• 代理人: 蘇蕾;高瑜

1.一種用于評估穿心蓮抗菌活性的方法，所述方法以穿心蓮抑菌率I%來評估穿心蓮抗菌活性，所述I%根據以下的公式（1）來計算：

I%=（t₂–t₀）/t₀×100%???（1）

其中，t₀為在未經藥物干預的細菌生長代謝熱譜曲線中的第二指數生長期的達峰時間，t₂為在經穿心蓮干預的細菌生長代謝熱譜曲線中的第二指數生長期的達峰時間，其中干預細菌生長代謝的穿心蓮供試品溶液的濃度在0.4～4mg/mL之間，優選地為3mg/mL。

2.根據權利要求1所述的方法，所述細菌為大腸桿菌、痢疾桿菌或綠膿桿菌，優選地為痢疾桿菌。

3.根據權利要求1所述的方法，其中，如下獲得所述未經藥物干預的細菌生長代謝熱譜曲線：

將含有接種了細菌的培養基的安瓿瓶放入微量量熱儀的樣品池中，用微量量熱儀來跟蹤記錄未經藥物干預的細菌生長代謝過程中的熱譜曲線,當熱譜曲線再次回到基線時結束試驗，即得到所述未經藥物干預的細菌生長代謝熱譜曲線。

4.根據權利要求1所述的方法，其中，如下獲得經穿心蓮干預的細菌生長代謝熱譜曲線：

用培養細菌的培養基和穿心蓮樣品來配置所述穿心蓮供試品溶液，用微孔濾膜過濾除菌，備用，優選地用0.22μm微孔濾膜過濾除菌；

將穿心蓮供試品溶液和接種了細菌的培養基兩者加入到安瓿瓶中并混勻，然后將所述安瓿瓶放入微量量熱儀的樣品池中，用微量量熱儀來跟蹤記錄經穿心蓮干預的細菌生長代謝過程中的熱譜曲線，當熱譜曲線再次回到基線時結束試驗，即得到經穿心蓮干預的細菌生長代謝熱譜曲線。

5.根據權利要求3或4所述的方法，其中，用于獲得未經藥物干預的細菌生長代謝熱譜曲線或經穿心蓮干預的細菌生長代謝熱譜曲線的細菌為培養至第3代至第5代的細菌，優選地為培養至第3代的細菌。

6.根據權利要求3或4所述的方法，其中，在所述接種了細菌的培養基中，細菌接種量為1×10⁵cells/mL、1×10⁶cells/mL或1×10⁷cells/mL，優選地為1×10⁶cells/mL。

7.根據權利要求4所述的方法，其中，穿心蓮樣品為穿心蓮干浸膏。

8.根據權利要求7所述的方法，其中，所述穿心蓮干浸膏是用通過回流提取、超聲提取或冷浸提取的濾液來制備的干浸膏；優選地，所述穿心蓮干浸膏是用通過回流提取的濾液來制備的干浸膏。

9.根據權利要求4所述的方法，其中，所述穿心蓮干浸膏通過以下來制備：

稱取穿心蓮全草，用水浸泡，回流提取，合并提取液并用濾紙過濾，濾液減壓回收水，真空干燥，制得干浸膏；

其中，水優選地為去離子水或純水；其中以毫升計的用于浸泡的水的體積優選地為以克計的穿心蓮全草重量的5～10倍；優選地回流提取2次，每次回流的時間優選地為1.5小時至2小時。

10.根據權利要求4所述的方法，其中，所述接種了細菌的培養基和穿心蓮供試品溶液的體積比為1:5～5:5，優選地為5:5。