[發(fā)明專利]一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410059492.1
• 申請(qǐng)日: 2014-02-21
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103804090A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 韓融冰;路等學(xué);趙玉卉;王龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 甘肅省科學(xué)院生物研究所
• 主分類號(hào): C05G3/00
• 分類號(hào): C05G3/00
• 代理公司: 甘肅省知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 張克勤

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于菌種培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種及制備方法以及用該原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法。?

背景技術(shù)

羊肚菌是一種珍貴稀有的野生食藥用菌，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，羊肚菌生物活性有效組分食（藥）用真菌多糖的含量很高，其子實(shí)體多糖入藥有消積殺蟲的作用，能增強(qiáng)人體免疫功能，具有抗病毒、抗腫瘤作用，能降低膽固醇含量，防止動(dòng)脈硬化等。?

目前雖有報(bào)道稱已實(shí)現(xiàn)羊肚菌的人工栽培,但迄今未見(jiàn)商品化人工栽培羊肚菌的報(bào)道，究其原因主要是羊肚菌子實(shí)體形成階段對(duì)空氣十分敏感。利用野生子實(shí)體來(lái)提取羊肚菌多糖不但成本高，而且原料來(lái)源有限，以液體培養(yǎng)羊肚菌菌絲體和發(fā)酵液為主要原料提取多糖，既可降低成本又可提高生產(chǎn)效率，具有十分廣闊的應(yīng)用前景，而篩選適合羊肚菌液體培養(yǎng)的發(fā)酵工藝是提高羊肚菌多糖產(chǎn)率主要因素。?

傳統(tǒng)的液體培養(yǎng)發(fā)酵工藝要經(jīng)過(guò)接種、靜置培養(yǎng)和搖瓶培養(yǎng)等多個(gè)步驟，而接種塊的大小、薄厚及接種的好壞直接影響液體培養(yǎng)的產(chǎn)量，接種后菌種塊必須浮在液面不能沉下去，這樣靜置后才容易形成更多的菌絲體，成功完成液體培養(yǎng)。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種產(chǎn)量高的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種；?

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種該羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法。

羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種是由羊肚菌一級(jí)種培養(yǎng)而成的菌種，以固體培養(yǎng)基在專用瓶或袋進(jìn)行培養(yǎng)，用于羊肚菌液體培養(yǎng)，操作簡(jiǎn)單，菌絲生長(zhǎng)快，發(fā)酵周期短，簡(jiǎn)化了傳統(tǒng)羊肚菌液體培養(yǎng)過(guò)程中菌種逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)的工藝。?

本發(fā)明技術(shù)方案如下：?

一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種，它由羊肚菌（Morchella?sp.）經(jīng)過(guò)接種培養(yǎng)后制得。

一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的制備方法，包括下列步驟：?

A、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基包括下列質(zhì)量份配比的組份，木屑15.0份—25.0份、麥麩65.0份—75.0份、玉米粉4.5份—6.0份、黃豆粉3.7份—5.0份，拌水量為上述組分總質(zhì)量的120%—140%；

B、羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種的培養(yǎng)，將羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基裝袋滅菌冷卻后，無(wú)菌操作接入羊肚菌（Morchella?sp.），于23^OC—27^?OC溫度下恒溫培養(yǎng)得羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種。

優(yōu)選地，所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基還包括下列組份，磷酸氫二鉀0.10—0.20質(zhì)量份，磷酸二氫鉀0.10—0.25質(zhì)量份，硫酸鎂0.10—0.20質(zhì)量份份的，維生素B₁10—15毫克/千克，維生素B₂10—15毫克/千克。?

優(yōu)選地，所述羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種培養(yǎng)基在0.12MPa壓力下滅菌1小時(shí)。?

用上述方法制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的方法，它包括下列步驟：?

A、液體發(fā)酵培養(yǎng)基制備：玉米粉100g,黃豆粉50g,硫酸鎂10g，磷酸二氫鉀15g，磷酸氫二鉀15g，加水至10L，熬煮過(guò)濾后裝入600ml三角瓶，每瓶裝料300ml,?棉花塞封口，高壓0.12MPa滅菌30min，冷卻后可得液體發(fā)酵培養(yǎng)基；

B、羊肚菌液體培養(yǎng)，將權(quán)利要求4制備的羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種在無(wú)菌條件下攪碎，接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，置于搖床上培養(yǎng)，以培養(yǎng)液清亮為培養(yǎng)終點(diǎn)。優(yōu)選地，所述步驟B中羊肚菌液體培養(yǎng)以180r/min的轉(zhuǎn)速，在25^oC溫度下?lián)u瓶培養(yǎng)。

本發(fā)明羊肚菌（Morchella?sp.）801號(hào)購(gòu)買于四川綿陽(yáng)食用菌研究所。?

本發(fā)明以木屑、麥麩、玉米粉、黃豆粉為主要原料制作羊肚菌原種培養(yǎng)基，經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)接、培養(yǎng)后，形成一種用于羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種，此固體發(fā)酵原種無(wú)需靜置培養(yǎng)，無(wú)需逐級(jí)擴(kuò)大，接入液體培養(yǎng)基后可實(shí)現(xiàn)多個(gè)萌發(fā)點(diǎn)，可以簡(jiǎn)化傳統(tǒng)液體培養(yǎng)發(fā)酵工藝，縮短發(fā)酵周期，提高菌絲體產(chǎn)量和發(fā)酵效率，操作簡(jiǎn)單，菌絲生長(zhǎng)快，較傳統(tǒng)工藝發(fā)酵周期縮短,羊肚菌胞外多糖含量顯著提高。?

附圖說(shuō)明

圖1是一種羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種制備方法的工藝流程圖；?

圖2是一種用羊肚菌液體培養(yǎng)發(fā)酵原種進(jìn)行液體培養(yǎng)的工藝流程圖;

圖3是傳統(tǒng)液體培養(yǎng)方法的工藝流程圖。?

具體實(shí)施方式

下面的實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的技術(shù)人員更好地理解本項(xiàng)技術(shù)，但不以任何方式限制本發(fā)明。?