[發明專利]ZFP28的變異位點在制備診斷精神分裂癥的試劑盒中的用途

無效

• 申請號: 201410057496.6
• 申請日: 2014-02-20
• 公開（公告）號: CN103834730A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 許琪;沈巖
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院基礎醫學研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司 11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本發明涉及診斷領域，更具體地涉及ZFP28基因的單核苷酸變異位點在制備診斷精神分裂癥的試劑盒中的用途。

背景技術

精神分裂癥（Schizophrenia）是一種常見的病因尚未完全闡明的重型精神疾病，患者表現為特殊的思維、情感、知覺和行為等方面的障礙和精神活動與環境不協調。流行病學研究表明精神分裂癥在人群中的終生患病率約為1%。該病多為青春后期和成年早期發病，男性和女性的發病率相當，但是男性的平均發病年齡較女性早。另外，該病的發生存在種族及地域的差異，心理、社會等環境因素對于發病也有影響。

有證據表明，遺傳因素在精神分裂癥的發病中發揮著重要作用，遺傳度高達81%。對精神分裂癥易感基因的探索一直是精神分裂癥研究的熱點。

以往的遺傳學分析，包括連鎖分析和關聯研究。連鎖分析是一項基于家系的基因定位的方法。其基本原理是：根據基因在染色體上呈直線排列，不同基因相互連鎖成連鎖群的原理，即應用被定位的基因與同一染色體上另一基因或遺傳標記相連鎖的特點進行定位。比如，2003年Williams?N.M.等人使用372個微衛星標記進行連鎖分析，標記間的平均距離為10cM，發現10q25.3-26.3、17p11.2-25.1和22q11區域與精神分裂癥存在連鎖。關聯研究是基于連鎖不平衡（linkage?disequilibrium，LD）的原理。在人群中，不同基因座位上兩個或多個位點的某個等位基因出現在同一單體型上的頻率與預期的隨機頻率之間存在明顯差異的現象。處于連鎖不平衡區域的兩個位點的等位基因在傳遞給下一代時經常一起傳遞。關聯研究是通過比較患者組和對照組間多態性遺傳標記在等位基因、基因型和單倍型頻率分布的差異，得到這一遺傳標記和疾病基因關聯的相對危險度，分析該位點是否和疾病直接相關，或者尋找和相關多態性遺傳標記處連鎖不平衡區域的疾病易感基因。全基因組關聯研究（GWAS）從整個基因組層面無偏差地分析基因組中遺傳變異與疾病的關系。如O'DonovanM.C.等對歐裔人群的GWAS研究中，發現ZNF804A與精神分裂癥存在相關性。

發明內容

根據本發明的一些實施方式，提供ZFP28基因變異位點在制備診斷精神分裂癥的試劑盒中的用途。在一些實施方式中，ZFP28基因變異位點選自如下一個或多個：c.1441T>C、c.961G>A、c.1052T>C、c.1081C>T、c.1511C>T、c.1170G>T、c.1208A>G和c.2017T>C。在一個優選實施方式中，ZFP28基因變異位點為c.1441T>C。

在本發明上下文中，c.1441T>C表示ZFP28編碼序列的第1441位核苷酸由T變為C；c.961G>A表示ZFP28編碼序列第961位核苷酸由G變為A；依此類推。

根據本發明的一些實施方式，提供一種用于診斷精神分裂癥的試劑盒，其含有針對ZFP28基因變異位點的引物對，所述ZFP28基因變異位點選自如下一個或多個：c.1441T>C、c.961G>A、c.1052T>C、c.1081C>T、c.1511C>T、c.1170G>T、c.1208A>G和c.2017T>C。

在一些實施方式中，試劑盒還可以根據需要含有基因組DNA提取試劑和/或PCR反應體系試劑。任何本領域公知的適當的DNA提取試劑和PCR反應體系試劑均可用于本發明的試劑盒。在一些實施方式中，PCR反應體系試劑包括dNTP、DNA聚合酶、PCR反應緩沖液。在一個具體的實施方式中，對包括突變位點上下游約300bp的片段進行PCR擴增。然而技術人員理解，在包括突變位點的上下游適當區域內進行擴增，均可以實現對突變位點的檢測，包括但不限于突變位點上下游300bp范圍內、250bp范圍內、220bp范圍內、200bp范圍內、180bp范圍內、150bp范圍內、120bp范圍內、100bp范圍內。引物設計的原則如下：引物長度在15-30bp，優選15-25bp；G+C含量40-48%，優選43-46%；引物內部和引物之間無互補序列，無發卡結構形成；引物Tm值在40到60℃之間，上下游引物的Tm值相差不超過2℃；確保各引物的綜合評分達到90分以上。因此，針對各變異位點的引物對并不限于具體實例中所用的引物對。