[發(fā)明專利]一種忍冬葉有效提取物的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410057244.3
• 申請日: 2014-02-20
• 公開（公告）號: CN103830306B
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發(fā)明（設計）人: 趙志全;蘇瑞強;李守信;李蔚群
• 申請（專利權）人: 魯南制藥集團股份有限公司
• 主分類號: A61K36/355
• 分類號: A61K36/355;A61K127/00
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技術領域

本發(fā)明涉及一種忍冬葉有效提取物的制備方法，屬于中藥領域。

背景技術

忍冬葉為忍冬屬忍冬（Lonicera japonica Thunb.）的干燥葉，李時珍謂：“忍冬莖葉及花功用皆同”，藥效及成分與金銀花基本相同，具有清熱解毒、疏風通絡、保肝利膽之功效，常用于治療上呼吸道感染，咽痛、喉痹、扁桃體炎、口腔炎等。忍冬葉的主要有效成分為綠原酸、黃酮、苷類（皂苷、環(huán)烯醚萜苷）、揮發(fā)油和其它微量成分等，具有抗病原微生物、降血壓、降血脂、抗腫瘤等多種作用。

忍冬花因其產(chǎn)量有限，常供不應求。而忍冬葉與花同株，為了保證花蕾的正常生長，忍冬需多次修剪整形，每年可得大量的葉，而這些忍冬葉為忍冬傳統(tǒng)的廢棄部分，一直被視為非藥用部位而長期未得到利用，浪費現(xiàn)象十分嚴重。有文獻報道，忍冬葉與金銀花的主要有效成分均為酚酸類化合物，單位重量的忍冬葉有機酸的含量為金銀花的70%，總黃酮含量高于花蕾，而且忍冬葉粗黃酮的抑菌效果和抗氧化活性均高于忍冬花中的綠原酸粗品，具有相當高的研究和應用價值。

對于忍冬葉中綠原酸、總黃酮、總酚酸和環(huán)烯醚萜苷等大類成分的提取、分離，國內已有詳細的專利及文獻報道，例如，中國專利文獻CN102988457A公開了一種用灰氈毛忍冬葉提取總黃酮的方法，包括水提醇沉、D101或AB—8樹脂純化等步驟；中國專利CN103183616A提供了一種從紅腺忍冬葉中提取綠原酸的方法，包括醇提、凝絮沉淀、樹脂分離、濃縮、重結晶等步驟；中國專利CN103142677A公開了一種從忍冬葉中提取酚酸類化合物的方法，具體步驟包括水煎煮提取、調節(jié)pH、聚酰胺柱純化等步驟；胡潤準以60%的乙醇破碎提取忍冬葉3次，每次2min，合并醇提液，濃縮，上聚酰胺柱以不同濃度的乙醇洗脫，得相應的洗脫份，即得綠原酸和總黃酮的分離產(chǎn)物（胡潤準，袁珂，孫德梅.忍冬葉中綠原酸和總黃酮分離工藝的研究[J].河南科學，2006，17（4）：382-384.）；姜洪芳等以70%的乙醇回流提取忍冬葉，濃縮后以正丁醇萃取，正丁醇相減壓蒸干，上硅膠柱，再用乙酸乙酯、乙醇洗脫，洗脫液以甲醇或乙醇重結晶，得黃酮類化合物（姜洪芳，張衛(wèi)明，張玖.忍冬葉黃酮類化合物的提取分離與結構鑒定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學，2008，36（27）：11795-11797.）；馬俊利等以75%的乙醇回流提取忍冬葉3次，合并提取液，減壓濃縮，后以正丁醇萃取，取正丁醇層經(jīng)硅膠色譜柱層析，以氯仿—甲醇梯度洗脫，后經(jīng)反復硅膠色譜柱色譜和制備液相色譜分離純化，再經(jīng)重結晶處理，得到環(huán)烯醚萜苷類成分（馬俊利，肖楠，宋琨.忍冬葉中的環(huán)烯醚萜苷類成分[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（9）：121-123.）。

以上都是關于忍冬葉中綠原酸、總黃酮、總酚酸和環(huán)烯醚萜苷等大類成分的提取、分離，但有關忍冬葉總有效成分提取物的提取、純化研究卻甚少。馬俊利用70%的乙醇回流提取干燥的金銀忍冬葉3次，合并提取液，減壓濃縮得浸膏，將浸膏混懸于適量的水中，分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯部分經(jīng)反復硅膠色譜柱，以氯仿—甲醇（200:1—1:1）梯度洗脫，TLC檢測，得10個流份，2—4流份經(jīng)硅膠色譜柱分離、純化，得到目標產(chǎn)物（馬俊利.金銀忍冬葉化學成分的分離與鑒定[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2013，9（2）：33-34.）。該方法使用較多有害溶劑，操作步驟繁瑣，所得并非忍冬葉總有效成分提取物，而且其主要目的是為了分離忍冬葉中的化學成分并進行鑒定；胡潤準，萬焱用15倍量60%的乙醇提取忍冬葉3次，每次1小時，合并醇提液，減壓濃縮，加入0.5%的活性炭煮沸0.5小時，過濾，在減壓的條件下制備成干粉，將干粉加適量的水溶解后加在D101大孔吸附樹脂柱上部，后用10%、20%、30%、40%、50%、60%和70%的乙醇作為洗脫劑進行洗脫，按每份100mL收集，以TLC檢識并合并相同成分的洗脫液，分離得到綠原酸、總黃酮和其它成分（胡潤準.萬焱.忍冬葉活性成分分離工藝的研究[J].中成藥，2007，29（7）：附6-附7.）。該方法中相同的洗脫組分要不斷用TLC檢識，操作步驟繁多，且分別用不同濃度乙醇洗脫、收集，大生產(chǎn)中難以實現(xiàn)，而且其得到的是分開的大類成分，并非忍冬葉總有成分提取物。

鑒于現(xiàn)有技術的不足，有必要發(fā)明一種新的制備忍冬葉有效提取物的制備方法，使之既能簡化操作過程，在最大程度上少用或不用有害溶劑，適合工業(yè)化大生產(chǎn)，又能提高有效提取物中各有效成分的含量。

發(fā)明內容

本發(fā)明所要解決的技術問題是克服現(xiàn)有提取、純化工藝的不足，提供一種簡單、有效的制備忍冬葉有效提取物的方法。

本發(fā)明的發(fā)明目的是通過以下方式實現(xiàn)的。