[發明專利]快速鑒別寄生于馬屬動物的裸頭絳蟲的專用引物及其鑒別方法

有效

• 申請號: 201410053742.0
• 申請日: 2014-02-18
• 公開（公告）號: CN103952467A
• 公開（公告）日: 2014-07-30
• 發明（設計）人: 郭愛疆
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;C12N15/12
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司 11249
• 代理人: 牟彩萍

1.快速鑒別寄生于馬屬動物的裸頭絳蟲的專用引物，其特征在于：所述引物為：上游引物為5’-GCAGAGTTTTGCTGATTTTATGAAG-3’，下游引物為5’-CCACTATACTCAGTATTAAATCCACTAACAAG?-3’。

2.快速鑒別診斷馬屬動物裸頭絳蟲病的專用引物，其特征在于：所述引物為：上游引物為5’-GCAGAGTTTTGCTGATTTTATGAAG-3’，下游引物為5’-CCACTATACTCAGTATTAAATCCACTAACAAG?-3’。

3.寄生于馬屬動物的裸頭絳蟲的NAD1核苷酸序列，所述裸頭絳蟲為葉狀裸頭絳蟲和大裸頭絳蟲，其特征在于：所述葉狀裸頭絳蟲的NAD1核苷酸序列參見SEQ?ID?No.1，所述大裸頭絳蟲的NAD1核苷酸序列參見SEQ?ID?No.2。

4.快速鑒別寄生于馬屬動物的裸頭絳蟲的方法，其特征在于：應用權利要求2中所述引物對裸頭絳蟲的NAD1進行PCR擴增，測序，測序結果與SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2中的序列比對，若待測樣品的核苷酸測序結果與葉狀裸頭絳蟲核苷酸序列相似性高，則為葉狀裸頭絳蟲；若核苷酸測序結果與大裸頭絳蟲核苷酸序列相似性高，則為大裸頭絳蟲。

5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述PCR擴增的條件為：95℃預變性5min；94℃變性30s，53℃退火30s，72℃延伸30s，共30個循環；最后一個循環結束后，72℃延伸10min。

6.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述裸頭絳蟲的NAD1從孕節或蟲卵中提取。

7.根據權利要求7所述的方法，其特征在于：所述從蟲卵中提取裸頭絳蟲的NAD1的方法是先用沉淀法收集再用漂浮法收集。

8.根據權利要求4所述的方法，其特征在于：步驟如下：

（1）應用權利要求2中所述引物對裸頭絳蟲的NAD1進行PCR擴增，獲得PCR產物；

（2）經瓊脂糖凝膠電泳，回收PCR目的產物，將PCR目的產物與T-easy載體在16℃連接過夜，轉染JM109感受態細胞；

（3）挑選單菌落培養，PCR鑒定為陽性的重組質粒進行測序，測序結果與兩種絳蟲各自特有的核苷酸序列進行比對，若待測樣品的核苷酸測序結果與葉狀裸頭絳蟲核苷酸序列相似性高，則為葉狀裸頭絳蟲；若核苷酸測序結果與大裸頭絳蟲核苷酸序列相似性高，則為大裸頭絳蟲。