[發明專利]雙酚A的抗原模擬表位Ph3及其應用

無效

• 申請號: 201410053340.0
• 申請日: 2014-02-17
• 公開（公告）號: CN103848898A
• 公開（公告）日: 2014-06-11
• 發明（設計）人: 何慶華;許楊;孫澄浩;陳靜
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C12N15/11;G01N33/68
• 代理公司: 南昌新天下專利商標代理有限公司 36115
• 代理人: 施秀瑾

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及雙酚A抗原模擬表位及其應用。

背景技術

雙酚A（Bisphenol?A，BPA）是一種化工材料，用來生產防碎塑料。資料表明，雙酚A屬于毒性化學物。動物試驗發現雙酚A有模擬雌激素的效果，即使很低的劑量也能使動物產生雌性早熟、精子數下降、前列腺增長的作用。此外，據文獻報道，雙酚A具有一定的胚胎毒性和致畸性。雙酚A能導致內分泌失調，威脅胎兒和兒童的健康，癌癥和新陳代謝紊亂導致的肥胖也被認為與此有關。在人類生活環境中，雙酚A無處不在，從飲料水瓶、醫療器械到食品包裝內里，很多塑料制品都含有雙酚A。對雙酚A進行即使檢測是預防和控制其危害的有效手段。

目前對雙酚A的檢測方法有液相色譜法、氣相色譜法、光譜分析法、電化學分析法、免疫學檢測等。雖然上述方法靈敏、精確、可靠，但所需設備昂貴且運行費用高，很難在基層工作中大規模開展。免疫學檢測方法以其靈敏度高、檢測方便、成本低廉等優勢在雙酚A的檢測中得到廣泛應用。但是該方法必須使用標準品，不僅增加了檢測成本，而且對檢測人員及環境易造成危害，在一定程度上制約了免疫學方法的應用和推廣。有鑒于此，人們開始采用抗獨特型抗體及抗原模擬表位技術來實現有害小分子物質標準品的替代，并取得了一定的進展。噬菌體展示肽庫技術的主要特點是可有效地篩選出與目標靶體特異結合的噬菌體展示多肽，該技術在探索受體與配體之間相互作用結合位點、尋求高親和力生物活性的配體分子、探索未知蛋白質空間結構表位、新型疫苗的研制等方面應用廣泛。

本方面通過用噬菌體展示肽庫技術，從肽庫中篩選出能與靶分子（抗雙酚A單克隆抗體）特異性結合的多肽（抗原模擬表位）。該抗原模擬表位具有與天然雙酚A分子相似的免疫反應特性，通過獲得的雙酚A抗原模擬表位，一替代價格昂貴且毒性強的雙酚A標準品，并作為競爭抗原或固相包被抗原應用于雙酚A的免疫學檢測。

發明內容

本發明的目的在于提供雙酚A的抗原模擬表位及其應用。

本發明以抗雙酚A單克隆抗體為靶分子，將靶分子固相包被于酶標板上，投入噬菌體隨機展示十二肽庫，進行親和淘選，獲得了雙酚A的抗原模擬表位Ph3。氨基酸序列如下：?YPAYTYNNLMHN。

本發明還涉及編碼上述抗原模擬表位氨基酸序列的核苷酸序列，分別對應為：?TATCCTGCGTATACGTATAATAATCTTATGCATAAT。

上述抗原模擬表位（多肽）結構中，大寫英文字母分別代表二十一種已知天然L-型氨基酸殘基或其D-型異構體的一種，即C代表半胱氨酸殘基，D代表天冬氨酸殘基，P代表脯氨酸殘基，R代表精氨酸殘基，K代表賴氨酸殘基，H代表組氨酸殘基，I代表異亮氨酸殘基，V代表纈氨酸殘基，Y代表酪氨酸殘基，S代表絲氨酸殘基，F代表苯丙氨酸殘基，E代表谷氨酸殘基，M代表甲硫氨酸殘基，G代表甘氨酸殘基，L代表亮氨酸殘基，Q代表谷氨酰胺殘基，W代表色氨酸殘基，N代表天冬酰胺殘基，A代表丙氨酸殘基，T代表蘇氨酸殘基。

所述抗原模擬表位的制備方法，可通過噬菌體擴增、化學合成或基因工程重組表達的方式進行大量制備；所述噬菌體擴增是指將展示有雙酚A抗原模擬表位的噬菌體，通過生物擴增的方式，大量繁殖生產展示有雙酚A抗原模擬表位的噬菌體粒子；所述化學合成指依據模擬表位模擬表位氨基酸序列，通過化學合成多肽的方式進行多肽合成；所述基因工程重組表達的方式是指將編碼模擬表位的基因，通過克隆至表達載體，以多肽-融合蛋白的形式進行雙酚A抗原模擬表位的大量制備。

本發明還涉及所述雙酚A抗原模擬表位在免疫學檢測分析中的應用。免疫學檢測的類型包括酶聯免疫吸附檢測、膠體金免疫層析、免疫斑點雜交等基于抗原-抗體特異性反應的免疫學分析檢測類型。

本發明雙酚A抗原模擬表位（YPAYTYNNLMHN）在應用時，可以把合成的模擬表位用于免疫學檢測分析，將通過噬菌體擴增獲得的展示有雙酚A抗原模擬表位（多肽）的噬菌體粒子直接用于分析檢測，當然，也可以將雙酚A抗原模擬表位從噬菌體上切下來代替雙酚A?標準品來進行免疫學檢測分析。

還涉及雙酚A抗原模擬表位以固相抗原或競爭抗原在免疫學檢測分析中應用。

還涉及雙酚A抗原模擬表位作為固相抗原在膠體金免疫層析檢測分析中的應用。

前述雙酚A抗原模擬表位可以代替價格昂貴且毒性強的雙酚A標準品，并作為競爭抗原或固相包被抗原應用于雙酚A的免疫學檢測，該抗原模擬表位具有天然雙酚A分子相似的免疫反應特性，效果非常好。