[發明專利]鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定用引物體系

無效

• 申請號: 201410052601.7
• 申請日: 2014-02-17
• 公開（公告）號: CN103789438A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 黨平;宋平;王瑜;杜雨威
• 申請（專利權）人: 蘇州市紅冠莊國藥飲片有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 昆山四方專利事務所 32212
• 代理人: 盛建德

1.一種鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定用引物，其特征在于：由下列引物對組成：?

（1）對鹿12S?rRNA基因進行擴增生成鹿特異性擴增片段的引物對Ⅰ：?

正向引物：5’-GCCTTCCTATTGACCCTTAATAG-3’?

反向引物：5’-AGCGGCTGTAAAGTTACTTTCGT-3’；?

（2）對牛Cytb基因進行擴增生成牛特異性擴增片段的引物對Ⅱ：?

正向引物：5’-CCCTCTTACTAATTCTAGCTCT-3’?

反向引物：5’-GTCCGATGGTGATATATGGGTG-3’；?

（3）對羊Cytb基因進行擴增生成羊特異性擴增片段的引物對Ⅲ：?

正向引物：5’-CGCCATGCTACTAATTCTTGTTCT-3’?

反向引物：5’-TGGAGGAAGGGTACAAGTACTAAG-3’；?

（4）對馬16S?rRNA基因進行擴增生成馬特異性擴增片段的引物對Ⅳ：?

正向引物：5’-TCAAGCTCAACGACACATCTAT-3’?

反向引物：5’-CCTGAAGGTTAAGGTTTGTGT-3’；?

（5）對驢16S?rRNA基因進行擴增生成驢特異性擴增片段的引物對Ⅴ：?

正向引物：5’-TTCAAGCTCAACGTCACACATA-3’?

反向引物：5’-TGTGTTGGGTTAACAATAGTCT-3’；?

（6）對豬16S?rRNA基因進行擴增生成豬特異性擴增片?段的引物對Ⅵ：?

正向引物：5’-CGTTAAAGCTCAACAAATTCACC-3’?

反向引物：5’-CCCTTTGTGGTTGAGTTGTTTAA-3’。?

2.基于權利要求1所述鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定用引物的鑒定方法，其特征在于：以樣品總DNA為模板，利用所述引物對Ⅰ、引物對Ⅱ、引物對Ⅲ、引物對Ⅳ、引物對Ⅴ和引物對Ⅵ分別進行PCR擴增實驗，反應結束后根據瓊脂糖凝膠電泳判定結果；所述樣品總DNA模板來自鹿、牛、羊、馬、驢和豬物種動物皮組織的混合，或上述各物種動物皮組織產品中的一種。?

3.根據權利要求2所述鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中的特定PCR反應體系包括下列組分：雙蒸水4.9體積份、10×PCR反應緩沖液1體積份、2mM?each的dNTPs1體積份、2.5U/μL的熱啟動高效Taq酶0.1體積份、經稀釋1000倍的總DNA模板1體積份、2μM正向引物1體積份和2μM反向引物1體積份。?

4.根據權利要求3所述鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中的特定PCR反應體系包括下列組分：雙蒸水4.9μL、10×PCR反應緩沖液1μL、2mM?each的dNTPs1μL、2.5U/μL的熱啟動高效Taq酶0.1μL、經稀釋1000倍的總DNA模板1μL、2μM正向引物1μL和2μM反向引物1μL。?

5.根據權利要求2所述鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定方法，其特征在于：所述PCR擴增實驗中特定PCR反應程序為：依次進行94℃下預變性3min，94℃變性30s，?63℃退火30s，72℃延伸45s，進行40次循環，72℃下延伸10min，最后在4℃下保持1min后結束。?

6.根據權利要求2至5中任一權利要求所述鹿牛羊馬驢豬動物皮組織DNA的PCR鑒定方法，其特征在于：所述瓊脂糖凝膠電泳結束后判定結果時，判定依據為所述引物對Ⅰ、引物對Ⅱ、引物對Ⅲ、引物對Ⅳ、引物對Ⅴ和引物對Ⅵ分別擴增出的DNA片段大小；其中?

鹿物種的引物對Ⅰ擴增出的DNA片段大小為376bp；?

牛物種的引物對Ⅱ擴增出的DNA片段大小為360bp；?

羊物種的引物對Ⅲ擴增出的DNA片段大小為231bp；?

馬物種的引物對Ⅳ擴增出的DNA片段大小為586bp；?

驢物種的引物對Ⅴ擴增出的DNA片段大小為232bp；?

豬物種的引物對Ⅵ擴增出的DNA片段大小為577bp。?