[發明專利]一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法

有效

• 申請號: 201410051062.5
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103777014A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 張倩;周亞竟;樊曉婷;陳慧卿;陳焰
• 申請（專利權）人: 江蘇大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 樓高潮

1.一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，按照下述步驟進行：

（1）介導癌細胞凋亡途徑的確定：首先，在用細胞培養瓶體外培養的癌細胞培養基中添加待篩選的化療藥物，收集藥物處理后不同時間的細胞，以細胞凋亡試劑盒檢測并確定何種藥物具有誘導癌細胞凋亡的功效，同時，確定發生癌細胞凋亡是由Caspase-3激活途徑還是由Calpain激活途徑所介導的；

（2）DNA聚合酶δ在不同細胞凋亡途徑中的行為變化：收集不同時間點、對應于步驟（1）中所處不同凋亡途徑介導的癌細胞，裂解細胞，高速離心后取上清進行SDS-PAGE電泳并轉膜，以分別抗DNA聚合酶δ四種亞基的抗體進行Western?blot分析，分別檢測四種亞基p125、p50、p68和p12在不同凋亡途徑中凋亡早期和凋亡晚期的特征變化，確定DNA聚合酶δ是某種細胞凋亡途徑的一個新靶標。

2.根據權利要求1所述的一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，其特征在于：其中步驟（2）中所述的DNA聚合酶δ的4個亞基p125、p68、p50和p12相應的cDNA分別源自人源DNA聚合酶基因POLD1、POLD3、POLD2和POLD4。

3.根據權利要求1所述的一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，其特征在于：其中步驟（2）中所述的以DNA聚合酶δ/p12為靶標的免疫反應所用抗人源DNA聚合酶?δ?四個亞基的抗體分別為：鼠抗p50多克隆抗體(ZJM5002)、兔抗p125多克隆抗體(ZJR12501)、兔抗p68多克隆抗體?(ZJR6803)、兔抗p12多克隆抗體?(ZJR1204)。

4.根據權利要求1所述的一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，其特征在于：其中步驟（1）中所述的誘導Calpain激活途徑介導癌細胞凋亡的藥物是外購的高選擇性鈣離子載體A23187。

5.根據權利要求1所述的一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，其特征在于：其中步驟（1）中所述的癌細胞為人宮頸癌HeLa細胞株HeLa-S3。

6.根據權利要求1所述的一種以DNA聚合酶δ為靶標篩選化療藥物及藥效的方法，其特征在于：其中步驟（1）中在確定由Calpain激活途徑介導的腫瘤細胞凋亡所用試劑盒為商業化鈣蛋白酶活性檢測試劑盒。