[發明專利]一種基于金納米錐聚集的圓二色信號檢測DNA的方法

有效

• 申請號: 201410051038.1
• 申請日: 2014-02-14
• 公開（公告）號: CN103776772A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 劉文靚;朱哲凝;高燕;唐智勇
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: G01N21/19
• 分類號: G01N21/19
• 代理公司: 北京品源專利代理有限公司 11332
• 代理人: 鞏克棟

1.一種基于金納米錐聚集的圓二色信號檢測DNA的方法，其特征在于，所述方法為：將含有DNA修飾的金納米錐的溶液與含有待檢測DNA的溶液混合進行退火反應；檢測圓二色光譜，當檢測到退火后相比退火前在550-850nm波段出現圓二色光譜的信號增強時，說明金納米錐發生聚集，待檢測DNA與金納米錐上修飾的DNA存在互補序列。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述圓二色光譜的信號強度與待檢測DNA的濃度呈正相關，通過檢測所述圓二色光譜的信號強度定量待檢測DNA的濃度。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述含有DNA修飾的金納米錐的溶液中還含有金納米球和/或金納米棒，且所述金納米錐的摩爾百分含量以金納米錐、金納米球和/或金納米棒的總量計為30%以上，優選50%以上，更優選70%以上，最優選90%以上。

4.根據權利要求1-3任一項所述的方法，其特征在于，所述退火溫度范圍為從60-90℃任一溫度降至20-50℃任一溫度，優選為從60℃降至20℃。

5.根據權利要求1-4任一項所述的方法，其特征在于，所述金納米錐上修飾的DNA與金納米錐的摩爾比為50-100：1，優選為100：1。

6.根據權利要求1-5任一項所述的方法，其特征在于，所述DNA修飾的金納米錐是巰基DNA修飾的金納米錐，所述巰基與金通過共價鍵連接將DNA修飾在金納米錐上；

優選地，所述巰基修飾在DNA的3’末端。

7.根據權利要求1-6任一項所述的方法，其特征在于，退火過程中所用的緩沖液體系為含0.25M氯化鈉、0.01重量%十二烷基磺酸鈉和0.01M的pH為7.4的磷酸鹽緩沖溶液。

8.根據權利要求1-7任一項所述的方法，其特征在于，所述待檢測DNA的濃度為納摩爾級，優選為5nM至40nM。

9.根據權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述金納米錐是通過對制備的金納米錐的初產物進行密度梯度離心得到的。

10.根據權利要求9所述的方法，其特征在于，所述金納米錐的初產物是通過如下方法制備得到的：

（1）在20-25℃條件下，將檸檬酸鈉和HAuCl₄水溶液混合，加入新制備的NaBH₄溶液，得到金晶種；

（2）將十六烷基三乙基溴化銨、HAuCl₄和硝酸銀溶液混合均勻配成生長溶液，加入抗壞血酸溶液后攪拌均勻，然后加入步驟（1）中所述金晶種，在20-25℃條件下靜置生長20-24小時，得到所述金納米錐的初產物；

優選地，所述步驟（1）中HAuCl₄、NaBH₄、檸檬酸鈉和水的摩爾比為1:（1-1.5）:（2-3）:（400-500）；

優選地，所述步驟（2）中HAuCl₄、十六烷基三乙基溴化銨、硝酸銀、抗壞血酸和水的摩爾比為1：（240-260）：（0.13-0.16）：（0.13-0.16）：（1200-1250）。