[發(fā)明專利]一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA lncRNA-BcrAR及其在抗細(xì)胞癌變中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410050006.X
• 申請(qǐng)日: 2014-02-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103789309A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳吉龍;郭桂杰;池曉娟;陳志龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福建農(nóng)林大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/11
• 分類號(hào): C12N15/11;C12N15/63;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學(xué)俊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種非編碼RNA及其應(yīng)用，具體涉及一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA?lncRNA-BcrAR及其在抗細(xì)胞癌變中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

Abl是一類可誘導(dǎo)包括淋巴細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的重要癌基因，包括v-Abl、Bcr-Abl和Tel-Abl等。v-Abl是Abelson鼠白血病病毒(Abelson?murine?leukemia?virus，簡(jiǎn)稱A-MuLV)的致癌基因。A-MuLV主要誘導(dǎo)鼠淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，從而引發(fā)小鼠急性淋巴瘤的產(chǎn)生。Bcr-Abl是由于人類細(xì)胞染色體易位使Bcr與c-Abl的C端接合而形成的融合基因，其表達(dá)產(chǎn)物為融合癌蛋白。Bcr-Abl是誘發(fā)人類慢性髓性白血病(Chronic?Myelogenous?Leukemia,?CML)最關(guān)鍵的癌基因，也可引起人淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化。盡管進(jìn)行了多年研究，但是關(guān)于Abl誘導(dǎo)細(xì)胞癌變的分子機(jī)制仍不完全清楚。

長(zhǎng)鏈非編碼RNA(long?noncoding?RNA，lncRNA)是轉(zhuǎn)錄組的一個(gè)重要組成部分，在細(xì)胞生命活動(dòng)中發(fā)揮著重要而廣泛的作用,近年來(lái)受到高度重視。隨著對(duì)長(zhǎng)鏈非編碼RNA研究的深入，發(fā)現(xiàn)越來(lái)越多的長(zhǎng)鏈非編碼RNA與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)。但是，對(duì)于Abl的作用機(jī)理，當(dāng)前大多集中在研究Abl癌基因與諸多蛋白編碼基因的相互調(diào)控上。關(guān)于長(zhǎng)鏈非編碼RNA在Abl介導(dǎo)的細(xì)胞癌變過(guò)程中的作用，以及長(zhǎng)鏈非編碼RNA在抗Abl誘導(dǎo)的白血病中的應(yīng)用，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA?lncRNA-BcrAR，以及l(fā)ncRNA-BcrAR在抗細(xì)胞癌變中的應(yīng)用。本發(fā)明所述長(zhǎng)鏈非編碼RNA?lncRNA-BcrAR，其轉(zhuǎn)錄本序列如SEQ?ID?NO:3所示的核苷酸序列，是與人類慢性髓性白血病發(fā)生相關(guān)的長(zhǎng)鏈非編碼RNA。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案如下：使用長(zhǎng)鏈非編碼RNA（long?noncoding?RNA，lncRNA）芯片檢測(cè)K562細(xì)胞中l(wèi)ncRNA的表達(dá)情況，人為干擾K562細(xì)胞中的Bcr-Abl基因后，lncRNA-BcrAR的表達(dá)明顯上調(diào)，提示lncRNA-BcrAR可能參與到Bcr-Abl誘導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程。提取K562細(xì)胞總RNA，反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，設(shè)計(jì)lncRNA-BcrAR?PCR擴(kuò)增用引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增，首次克隆得到lncRNA-BcrAR基因。構(gòu)建lncRNA-BcrAR過(guò)表達(dá)的Bcr-Abl或者v-Abl轉(zhuǎn)化的白血病細(xì)胞系（分別為K562和BC44細(xì)胞），研究lncRNA-BcrAR在Abl介導(dǎo)的細(xì)胞癌變中的作用，以及l(fā)ncRNA-BcrAR在抗Abl誘導(dǎo)的白血病中的應(yīng)用。

本發(fā)明的一種長(zhǎng)鏈非編碼RNA?lncRNA-BcrAR，其轉(zhuǎn)錄本序列為序列表中SEQ?ID?NO:3所示的核苷酸序列；重組質(zhì)粒pMSCV-lncRNA-BcrAR，含有所述lncRNA-BcrAR的核苷酸序列；質(zhì)粒pSIH-Bcr-Abl?shRNA含有核苷酸序列1和核苷酸序列2；

所述核苷酸序列1：

5’-GATCCGCAGAGTTCAAAAGCCCTTcttcctgtcagaAAGGGCTTTTGAACTCTGCtttttg-3’；

所述核苷酸序列2：

5’-AATTCAAAAAGCAGAGTTCAAAAGCCCTTTCTGACAGGAAGAAGGGCTTTTGAACTCTGCG-3’。本發(fā)明還保護(hù)所述長(zhǎng)鏈非編碼RNA?lncRNA-BcrAR在抗細(xì)胞癌變中的應(yīng)用。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：

本發(fā)明的lncRNA-BcrAR在人類慢性髓性白血病細(xì)胞系K562中呈現(xiàn)低水平表達(dá)，在Bcr-Abl介導(dǎo)的細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化及腫瘤形成過(guò)程中發(fā)揮重要作用。人為過(guò)表達(dá)K562細(xì)胞中的lncRNA-BcrAR，能夠明顯促進(jìn)細(xì)胞走向Imatinib（Abl陽(yáng)性白血病患者治療藥物）誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，并且顯著抑制K562白血病細(xì)胞在裸鼠體內(nèi)誘導(dǎo)的腫瘤生長(zhǎng)。另外，lncRNA-BcrAR在v-Abl介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化中也發(fā)揮重要作用。在A-MuLV轉(zhuǎn)化的小鼠白血病細(xì)胞BC44中，lncRNA-BcrAR的過(guò)表達(dá)，能夠明顯促進(jìn)細(xì)胞走向Imatinib誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，表明lncRNA-BcrAR在抗Abl誘導(dǎo)的細(xì)胞癌變中發(fā)揮重要作用，為Abl陽(yáng)性白血病的診療提供新的分子標(biāo)記和藥物靶點(diǎn)。

附圖說(shuō)明