[發明專利]用于檢測青花菜雜交種領秀純度的引物序列及方法

無效

• 申請號: 201410049825.2
• 申請日: 2014-02-13
• 公開（公告）號: CN103773886A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 江漢民;孫德嶺;李寬;姚星偉;單曉政;劉莉莉;文正華
• 申請（專利權）人: 天津科潤農業科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201
• 代理人: 陸藝

技術領域

本發明涉及農業生物技術領域，具體的涉及一種快速、準確用于檢測青花菜雜交種領秀純度的引物序列及方法。

背景技術

雜種優勢的利用是目前青花菜商品種生產的主要途徑，但是在雜交制種的過程中，由于品種自身的特性和許多不良因素的影響，易造成種子的生物學混雜或機械混雜，種子純度的鑒定是保證種子質量的關鍵環節，大田形態鑒定是目前普遍采用的方法，此方法直觀可靠，但周期長、成本高、易受環境條件的影響、表型特征會出現一定程度的偏差等問題，而且由于品種數量的日益增加，種質基礎越來越窄，遺傳變異變小，傳統的形態學鑒定已難以滿足實際需要。

品種的純度和真實性鑒定，歸根到底是品種間的基因型的差別鑒定。以遺傳物質DNA為基礎的分子標記技術是通過直接分析遺傳物質的多態性來診斷生物內在基因的排布規律，比較品種基因組DNA的結構與組成，通過鑒定DNA水平上的差異來鑒別品種。一個純合的品種，其基因型是一致的，這種基因型可以用某種分子標記加以確定，即基因型與分子標記組合具有對應關系，利用這一標記就可將這一品種與其它品種區別開來。

SSR（Simple?Sequence?Repeat，簡單重復序列）又稱微衛星DNA，是一類由幾個（多為1-6個）核苷酸為單位串聯重復而成的DNA序列，長度一般在100bp以內。這些短的串聯重復是在DNA復制過程中，由于DNA滑動、復制時，滑動鏈與互補鏈堿基錯配，而產生的一個或幾個重復單位的插入或缺失。微衛星基因序列中，重復基因的重復次數不同，且重復的基因序列不同，產生了簡單序列長度多態性和隨機擴增微衛星多態性，從而反映高度的等位基因多樣性。由于微衛星位點兩側的DNA序列較為保守，根據兩側的這個保守序列設計特定的引物，并通過PCR擴增，將其間的核心衛星DNA序列擴增出來，結合凝膠電泳技術，就可以對這些多態性進行比較分析。

SSR標記具有穩定可靠，操作簡單，時間短，效率高，對DNA質量要求不高，不受自然條件的影響等優點，已被廣泛應用于基因定位、種子純度檢測、植物進化及遺傳多樣性的研究。進行種子純度檢測時，可以識別母本因微量花粉導致的自交、父本混雜、花粉污染、機械混雜等帶來的非雜交種，遠遠優于田間的形態鑒定。

發明內容

本發明的目的是提供一種特異性好的用于檢測青花菜雜交種領秀純度的引物序列。

本發明的第二個目的是提供一種準確、快速地用于檢測青花菜雜交種領秀純度的方法。

本發明的技術方案概述如下：

用于檢測青花菜雜交種領秀純度的引物序列，所述引物序列由SEQ?ID?No.1所示的上游引物序列和SEQ?ID?No.2所示的下游引物序列組成。

用于檢測青花菜雜交種領秀純度的方法，包括以下步驟：

(1)提取待測青花菜基因組DNA；

(2)以待測青花菜基因組DNA為模板，以SEQ?ID?NO.1所示核苷酸序列為上游引物，以SEQ?ID?NO.2所示核苷酸序列為下游引物，進行PCR擴增；

(3)在擴增產物中加入凝膠上樣緩沖液，混勻，在2%的瓊脂糖凝膠1×TAE中電泳分離，電泳結束后凝膠成像系統對結果進行分析；

(4)依據各待測樣品在凝膠上的140bp和180bp處同時具有條帶，鑒定為青花菜領秀雜交種。

本發明建立了一套準確、快速的室內種子純度鑒定體系，利用該體系可明確區分青花菜雜交種領秀是否混入其它的雜種，為領秀品種的快速鑒定、品種保護和快速推廣提供技術支撐。本發明的方法相對于傳統技術具有以下優點：不受環境條件的影響，操作簡便快速，結果準確可靠。傳統的田間鑒定方法費時、費力，采用本方法僅需5-6個小時就可完成一個批次的鑒定，且不受樣本材料的限制，整個生育期，植物的任何組織都可采樣進行鑒定。利用本方法對本所培育的青花菜中領秀雜交種進行純度鑒定，鑒定結果與田間鑒定結果一致，在青花菜種子純度鑒定上具有很大的應用價值。

本發明提供的引物序列及檢測方法只適用于青花菜雜交種領秀的真實性及純度檢測。

附圖說明

圖1為青花菜雜交種領秀PCR擴增產物的凝膠電泳圖譜。

圖中M為DNA?Marker；P1為領秀父本，P2為領秀母本,1-9為待測青花菜樣品。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明進行具體的描述。

實施例1

用于檢測青花菜雜交種領秀純度的方法，包括以下步驟：