[發(fā)明專利]用于活體外測(cè)定致肥胖風(fēng)險(xiǎn)的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410049171.3
• 申請(qǐng)日: 2014-02-12
• 公開（公告）號(hào): CN104830961B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔡岳穎;林詠翔;關(guān)淑君;黃雪茵
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大江基因醫(yī)學(xué)股份有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6883
• 分類號(hào): C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海遠(yuǎn)同律師事務(wù)所31307
• 代理人: 張堅(jiān)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種檢測(cè)致肥胖風(fēng)險(xiǎn)的方法，尤指利用多個(gè)特定基因的單一核苷酸多型性于活體外測(cè)定致肥胖的風(fēng)險(xiǎn)的方法

背景技術(shù)

脂肪代謝與熱生成(thermogenesis)的調(diào)節(jié)影響到動(dòng)物利用能量的效率，而線粒體為動(dòng)物體內(nèi)涉及能量的位置，主要功能是產(chǎn)生三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)作為能量來源供給細(xì)胞利用。ATP的產(chǎn)生是通過內(nèi)膜上的ATP合成酶進(jìn)行二磷酸腺苷(adenosine diphosphate,ADP)的磷酸化耦合反應(yīng)而得。所謂耦合反應(yīng)(coupling)是指線粒體結(jié)合磷酸化反應(yīng)與質(zhì)子流動(dòng)(proton flow)的一種化學(xué)滲透作用。ATP生成可通過去耦合蛋白(uncoupling protein,UCP)進(jìn)調(diào)節(jié)，使能量不以ATP形式儲(chǔ)存，而是以熱能的形式釋放。編碼去耦合蛋白的基因，主要區(qū)分為去耦合蛋白1(uncoupling protein1,UCP1)、去耦合蛋白2(uncoupling protein2,UCP2)及去耦合蛋白3(uncoupling protein3,UCP3)三種，其在人體表達(dá)的位置不同。UCP1主要表達(dá)在褐色脂肪，UCP2在各個(gè)組織都有表達(dá)，UCP3則同時(shí)表達(dá)于褐色脂肪以及骨胳肌，其功能除了參與去耦合作用外，也有調(diào)節(jié)脂肪代謝與熱生成的功能。

實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)提高線粒體內(nèi)膜外質(zhì)子梯度濃度的消耗可以促進(jìn)基礎(chǔ)代謝率(Am J Physiol.1996Oct;271(4Pt1):C1380-9)，因此UCP3可調(diào)節(jié)骨胳肌線粒體內(nèi)膜質(zhì)子流動(dòng)產(chǎn)生熱能，影響人體基礎(chǔ)代謝能力，并增加能量消耗，減少過多的能量轉(zhuǎn)換成脂肪儲(chǔ)存。UCP3的基因變異研究中，位在外顯子3(exon3)內(nèi)的rs1800006(Tyr99Tyr,T→C)變異被發(fā)現(xiàn)C對(duì)偶基因與法國高加索人肥胖有關(guān)，且與功能性啟動(dòng)子(promoter)區(qū)域內(nèi)的rs1800849變異(-55C→T)有很強(qiáng)的連鎖不平衡(linkage disequiliburium,LD)，該變異可能影響UCP3基因mRNA表達(dá)的穩(wěn)定性(Diabetologia.2000Feb;43(2):245-9)。但在歐洲其他的研究中，發(fā)現(xiàn)rs1800006與糖尿病及胰島素抗性有關(guān)(Horm Res.2008;69(1):31-6.Epub2007Dec4;Diabetes.2008Apr;57(4):1101-7.doi:10.2337/db07-1269.Epub2008Jan25)。因此，目前尚未有利用UCP3基因變異來判斷測(cè)定致肥胖風(fēng)險(xiǎn)的技術(shù)，仍待有進(jìn)一步改進(jìn)的技術(shù)，以增加利用UCP3基因變異的檢測(cè)準(zhǔn)確性。

多配體蛋白聚糖(syndecan,SDC)是一種硫酸肝素蛋白聚糖(heparan sulfate proteoglycan,HSPG),主要由核心蛋白(core protein)及硫酸肝素聚糖鏈(heparin sulfate chain)兩個(gè)部分所組成。SDC基因家族主要存在于細(xì)胞膜上，由4個(gè)成員組成(SDC1～SDC4)，其中多配體蛋白聚糖3(syndecan3,SDC3)主要表達(dá)于神經(jīng)系統(tǒng)，包含控制食欲的下視丘。在正常小鼠禁食實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)禁食狀態(tài)下大腦下視丘神經(jīng)細(xì)胞SDC3基因表有顯著上升，推測(cè)此時(shí)SDC3可能是Agouti相關(guān)肽(Agouti-related peptide,AGRP)的共同受體，并通過AGRP結(jié)合褪黑素受體(melanocortin receptor)傳遞增加食欲的信號(hào)，促進(jìn)攝食行為。當(dāng)給予喂食時(shí)，SDC3膜外結(jié)構(gòu)(ectodomain)會(huì)脫離細(xì)胞膜使α黑色素刺激荷爾蒙(α-MSH)可與褪黑素受體結(jié)合傳遞抑制食欲的信號(hào)。SDC3基因剔除小鼠(SDC3null mice)也發(fā)現(xiàn)其脂肪量低于正常小鼠，且攝食量下降，能量消耗上升，推論SDC3基因可以調(diào)節(jié)體重及身體能量的平衡。然而，在針對(duì)歐洲人種的研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)SDC3的變異與肥胖發(fā)生無顯著相關(guān)，再者，各個(gè)SDC3的SNP位點(diǎn)與肥胖發(fā)生的關(guān)聯(lián)性有所不同。

基于上述可見，單獨(dú)以UCP3或SDC3基因作為肥胖基因指標(biāo)恐仍有爭(zhēng)議之處，特定而言，單獨(dú)利用UCP3或SDC3基因檢測(cè)致肥胖風(fēng)險(xiǎn)恐仍有不準(zhǔn)確的疑慮。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于現(xiàn)有技術(shù)檢測(cè)致肥胖風(fēng)險(xiǎn)的方法，仍有檢測(cè)結(jié)果不準(zhǔn)確的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種具有提高準(zhǔn)確率的檢測(cè)致肥胖風(fēng)險(xiǎn)的方法。