[發(fā)明專利]小麥抗穗發(fā)芽QTL位點(diǎn)QPhs.sicau-3B.1的分子標(biāo)記M3B-1a和M3B-2a及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410049031.6
• 申請(qǐng)日: 2014-02-12
• 公開（公告）號(hào): CN103866006A
• 公開（公告）日: 2014-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王際睿;劉亞西;劉宇嬌;毛雙雙;江千濤;蒲至恩;陳國躍;魏育明;鄭有良
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.兩個(gè)用于鑒定小麥新抗穗發(fā)芽主效QTL?QPhs.sicau-3B.1的分子標(biāo)記M3B-1a和M3B-2a，其特征在于，所述分子標(biāo)記與QPhs.sicau-3B.1之間的遺傳距離分別為3.9cM和2.0cM。

2.擴(kuò)增權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記的引物對(duì)，其特征在于，該兩個(gè)分子標(biāo)記的上游引物序列和下游引物序列分別如SEQ?ID?NO.1-SEQ?ID?NO.4所示。

3.鑒定權(quán)利要求1所述分子標(biāo)記的方法，其特征在于，

以待鑒定材料的DNA作為模板，分別用如SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2所示的引物對(duì)及SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4所示的引物對(duì)模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增；

分析PCR產(chǎn)物；

能擴(kuò)增出與CSCR6相同片段的鑒定材料為含有抗穗發(fā)芽主效QTL?QPhs.sicau-3B.1的植株，反之則為不含有抗穗發(fā)芽主效QTL?QPhs.sicau-3B.1的植株。

4.權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：

1）以待鑒定材料DNA作為模板，利用SEQ?ID?NO.1、SEQ?ID?NO.2所示的引物對(duì)模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增：

a.PCR擴(kuò)增體系：2.5μl10×PCR?buffer、0.75U?plus?Taq?DNA聚合酶、0.2mmol/L?dNTP、上下游引物各3μmol、模板DNA200ng、雙蒸水加至總量為25μl；

b.PCR程序：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s、55℃退火30s、72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸7min；

c.PCR產(chǎn)物檢測：PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳分離，電極緩沖液為1×TAE，恒定電壓150伏；凝膠最后用成像儀檢測；

2）以待鑒定材料DNA作為模板，利用SEQ?ID?NO.3、SEQ?ID?NO.4所示的引物對(duì)模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

a.PCR擴(kuò)增體系：2.5μl10×PCR?buffer、0.5U?plus?Taq?DNA聚合酶、0.2mmol/L?dNTP、上下游引物各2μmol、模板DNA200ng、雙蒸水加至總量為25μl；

b.PCR程序：94℃預(yù)變性5min；94℃變性30s、60℃退火45s、72℃延伸30s，共35個(gè)循環(huán)；72℃延伸10min；

c.PCR產(chǎn)物檢測：PCR產(chǎn)物用2%瓊脂糖凝膠電泳分離，電極緩沖液為1×TAE，恒定電壓150伏；凝膠最后用成像儀檢測；

3）鑒定結(jié)果為：能擴(kuò)增出與CSCR6相同片段的植株為含有抗穗發(fā)芽主效QTL?QPhs.sicau-3B.1的植株；反之，能擴(kuò)增出與Lang相同片段的植株為不含有該主效QTL的植株。

5.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記或權(quán)利要求2所述的引物對(duì)在小麥抗穗發(fā)芽材料創(chuàng)制中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記或權(quán)利要求2所述的引物對(duì)在分子標(biāo)記輔助小麥抗穗發(fā)芽育種中的應(yīng)用。

7.含有權(quán)利要求2所述的引物對(duì)的試劑盒。

8.權(quán)利要求7所述的試劑盒在小麥抗穗發(fā)芽材料創(chuàng)制中的應(yīng)用。

9.權(quán)利要求7所述的試劑盒在分子標(biāo)記輔助小麥抗穗發(fā)芽育種中的應(yīng)用。