[發明專利]一種測定人血漿中丹參素，間位甲基丹參素，原兒茶醛及原兒茶酸的方法有效

申請號：	201410048909.4	申請日：	2014-02-13
公開（公告）號：	CN104849379B	公開（公告）日：	2017-10-31
發明（設計）人：	李偉;羅瑞芝;褚揚;楊柳;馬曉慧;郭治昕;周水平;孫鶴	申請（專利權）人：	天士力制藥集團股份有限公司
主分類號：	G01N30/88	分類號：	G01N30/88
代理公司：	北京華科聯合專利事務所(普通合伙)11130	代理人：	王為
地址：	300410 天津市北辰區淮河***	國省代碼：	天津;12
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種測定血漿丹參間位甲基兒茶方法
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【說明書】：

技術領域：

本發明涉及一種藥物含量的測定方法，特別涉及一種測定人血漿中丹參素，間位甲基丹參素，原兒茶醛及原兒茶酸的方法。

背景技術：

復方丹參滴丸為天士力公司開發的活血化瘀、理氣止痛中藥，用于胸中憋悶、心絞痛，其主要成分為丹參、三七、冰片，其藥理作用包括1增加冠脈血流量，2增加心肌耐缺氧保護缺血心肌，3抗血小板聚集防止血栓形成，4改善微循環。

復方丹參滴丸中丹參味苦，性微寒，具有活血化瘀，養血安神，涼血排癰和排毒生肌的功效，是中藥活血化瘀的常用藥物。丹參藥材主含脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸類成分，尚含有黃酮類、三萜類、甾醇等其他成分。二萜類成分中屬醌、酮型結構的有丹參酮I、ⅡA、Ⅱ_R、V、Ⅵ，隱丹參酮，異丹參酮I、Ⅱ、II_B，二氫丹參酮I等。水溶性的酚酸類成分有丹參素，原兒茶醛，咖啡酸及丹參素與咖啡酸的衍生物或二聚物酯化而成的縮酚酸。

丹參素、原兒茶醛是復方丹參滴丸的主要成分，近年來，有關生物樣品中丹參素、原兒茶醛、原兒茶酸的含量測定方法(如HPLC、LC-MS/MS等)有較多報道，但大多為上述化合物單獨測定的方法。據文獻報道，丹參素、原兒茶醛在人體會分別代謝生成間位丹參素和原兒茶酸。

中藥藥物代謝動力學是應用動力學原理，研究中藥活性成分、組分、單味藥和復方體內吸收、分布、代謝、排泄和毒性的動態變化規律及其體內時-量、時-效關系，并用數學函數加以定量描述的一門新興學科。開展中藥藥物代謝動力學研究對闡明和揭示中藥藥效物質基礎和作用機制，設計及優選中藥給藥方案，促進中藥新藥研發、劑型改進及質量控制，均具有重要意義。目前中藥藥動學研究方法歸納起來可分為兩大類，一類是針對成分明確的中藥及復方，即血藥濃度法；另一類是化學基礎研究薄弱成分尚不明確的中藥及復方，該類主要以生物效應法為研究手段，包括藥理效應法、藥物累積法、效量半衰期法、微生物法等。液相色譜質譜法是最近十幾年來發展起來的一種新的分離分析方法，由于其高選擇性和高靈敏度已成為藥代動力學研究的一種較理想的檢測方法。

為深入研究復方丹參滴丸主要成分在人體內的吸收及代謝過程，需要建立一種丹參素、原兒茶醛及其代謝產物同時測定的方法。

本發明經過研究找到一種丹參素、原兒茶醛、間位丹參素和原兒茶酸人血漿中聯測的LC-MS/MS方法，本方法具有專屬性強、靈敏度高、準確性和重現性好等優點，滿足人體藥代動力學要求。

發明內容：

人在服用含有丹參的藥物，如復方丹參滴丸后，經過吸收和代謝，血漿中含有丹參素，間位甲基丹參素，原兒茶醛及原兒茶酸。為檢測服用復方丹參滴丸后人體血漿中上述成分的含量本發明提供了一種測定人血漿中丹參素，間位甲基丹參素，原兒茶醛及原兒茶酸的方法，所述方法，包括以下步驟：

1）對照品儲備液的制備

稱取丹參素、間位甲基丹參素、原兒茶醛和原兒茶酸對照品，用甲醇溶解，即得丹參素、間位甲基丹參素、原兒茶醛和原兒茶酸對照品儲備液。

2）內標溶液的制備

取內標物香草酸用甲醇溶解即得內標溶液。

3）血漿樣品處理方法

取血漿樣品，加入內標溶液，甲醇，鹽酸，乙酸乙酯，混合均勻后，離心取上清乙酸乙酯層，干燥，用甲醇復溶，離心，得血漿樣品上清液。

4）含量測定

采用LC-MS/MS色譜法，將上述對照品儲備液和血漿樣品上清液注入色譜儀，得到色譜圖，根據色譜圖中色譜峰的面積計算丹參素、間位甲基丹參素、原兒茶醛和原兒茶酸在血漿中的濃度。