[發(fā)明專利]1,5-脫水山梨醇免疫原及其特異性抗體及檢測(cè)試劑

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410047074.0
• 申請(qǐng)日: 2014-02-11
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103804491A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-05-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 虞留明;李冬;唐燕;張曼;顧國(guó)浩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 蘇州博源醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/765
• 分類號(hào): C07K14/765;C07K14/795;C07K14/47;C07K16/44;G01N33/68;G01N33/577;C07D309/10
• 代理公司: 南京縱橫知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 32224
• 代理人: 董建林

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及1,5-脫水山梨醇免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種1,5-脫水山梨醇免疫原及其特異性抗體及檢測(cè)試劑。

背景技術(shù)

1,5-脫水山梨醇（1,5-anhydro?glucitol，1,5-AG），其結(jié)構(gòu)式如式（III）所示：

1,5-脫水山梨醇(1,5-anhydro?glucitol，1,5-AG)又稱為1,5-脫水葡萄糖醇，是一種具有吡喃環(huán)結(jié)構(gòu)的六碳單糖。1,5-AG的結(jié)構(gòu)與葡萄糖十分相似，兩者區(qū)別僅在于葡萄糖C-1位置上的羥基被氫所取代。1,5-AG主要存在于人體血液、腦脊液及各組織器官中，血清中1,5-AG濃度一般為12-40mg/L，其代謝較穩(wěn)定。當(dāng)患有糖尿病時(shí)血清1,5-AG濃度會(huì)顯著降低，其機(jī)理是：糖尿病患者大量葡萄糖由尿中排出競(jìng)爭(zhēng)性的抑制了1,5-AG經(jīng)腎小管的重吸收，使1,5-AG大量經(jīng)尿排出，導(dǎo)致血液中1,5-AG濃度下降，且下降程度與糖尿病的嚴(yán)重程度顯著相關(guān)。研究表明：血液中1,5-AG與葡萄糖(GLU)、糖化血紅蛋白(HbAlc)、果糖胺(FMN)都呈顯著的負(fù)相關(guān)，其水平可反映近一周內(nèi)的血糖和尿糖情況，是糖尿病診斷與治療的靈敏指標(biāo)，日本于上世紀(jì)九十年代初就把1,5-AG作為糖尿病診斷和療效檢測(cè)的重要指標(biāo)。此外，1,5-AG還有其它多種臨床應(yīng)用價(jià)值，例如，1,5-AG能反映餐后高血糖峰值，可作為非糖尿病人群監(jiān)測(cè)餐后高血糖相關(guān)的心血管危險(xiǎn)發(fā)生率的指標(biāo)；血漿或尿中的1,5-AG濃度還能很好的反映慢性腎功能衰竭病人的腎小管重吸收功能，因?yàn)?,5-AG重吸收系統(tǒng)比葡萄糖重吸收系統(tǒng)更容易受損。

檢測(cè)1,5-脫水山梨醇的方法有很多，如高效液相色譜法、微柱層析法、化學(xué)發(fā)光法等，各有其優(yōu)缺點(diǎn)。其中高效液相色譜法操作比較復(fù)雜，且試劑需現(xiàn)用現(xiàn)配，不能長(zhǎng)期保存，因此不適合大批量臨床檢測(cè)使用；微柱層析法、化學(xué)發(fā)光法均需昂貴的專用儀器，操作繁瑣，也不適合用于臨床常規(guī)檢驗(yàn)。目前適用于自動(dòng)化分析儀的1,5-AG測(cè)定方法主要是酶法，包括ADP-HK-NADPH方法和GK-PROD方法。但是，現(xiàn)有的酶法測(cè)定試劑盒成本較高、價(jià)格昂貴，且大多為干粉試劑，穩(wěn)定性、靈敏度、特異性等方面均不能滿足臨床檢驗(yàn)的要求。

直接用1,5-脫水山梨醇免疫動(dòng)物無(wú)法獲得抗1,5-脫水山梨醇特異性抗體。目前市場(chǎng)上缺乏穩(wěn)定性好、靈敏度高、特異性強(qiáng)的1,5-脫水山梨醇檢測(cè)試劑，尤其是質(zhì)量好的自動(dòng)化檢驗(yàn)試劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種免疫原性強(qiáng)的1,5-脫水山梨醇免疫原。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供使用本發(fā)明1,5-脫水山梨醇免疫原制備得到的特異性強(qiáng)的抗1,5-脫水山梨醇特異性抗體。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種1,5-脫水山梨醇衍生物。

本發(fā)明的再一個(gè)目的在于提供一種1,5-脫水山梨醇免疫原的制備方法。

本發(fā)明的又一個(gè)目的在于提供一種1,5-脫水山梨醇免疫原及抗1,5-脫水山梨醇特異性抗體在制備1,5-脫水山梨醇檢測(cè)試劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

1,5-脫水山梨醇免疫原，其結(jié)構(gòu)式如式（Ⅰ）所示：

式中，R為連接基團(tuán)-(CH₂)_n-COO-，n是1至20之間的整數(shù)，載體為具有免疫原性的蛋白質(zhì)或多肽。

前述的1,5-脫水山梨醇免疫原，R為-(CH₂)₄-COO-。

一種抗1,5-脫水山梨醇特異性抗體，由所述的1,5-脫水山梨醇免疫原免疫動(dòng)物后生產(chǎn)得到。

前述的一種抗1,5-脫水山梨醇特異性抗體，所述的抗體為完整的抗體分子，或者為，保留與1,5-脫水山梨醇特異性結(jié)合的能力的抗體片段或抗體衍生物。

一種1,5-脫水山梨醇衍生物，其結(jié)構(gòu)式如式（II）所示：

上述R為連接基團(tuán)-(CH₂)_n-COO-，n為1至20之間的整數(shù)。

1,5-脫水山梨醇免疫原的制備方法，由載體和所述的1,5-脫水山梨醇衍生物連接而成，取n=4時(shí)，其特征在于：1,5-脫水山梨醇衍生物的制備步驟如下：