[發明專利]形成目標構成物的二維分布圖像的方法

無效

• 申請號: 201410046838.4
• 申請日: 2010-03-30
• 公開（公告）號: CN103760220A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 小松學;橋本浩行
• 申請（專利權）人: 佳能株式會社
• 主分類號: G01N27/62
• 分類號: G01N27/62
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 李穎

本申請是申請日為2010年3月30日、國際申請號為PCT/JP2010/056120、國家申請號為201080015616.6、發明名稱為“形成質量圖像的方法”的專利申請的分案申請。

技術領域

本發明涉及使用質譜分析法（mass?spectrometry）來獲取關于分析物中的構成物（constituent）的質量的信息作為圖像的方法，特別是涉及通過信號強度的歸一化（normalize）來形成包含于組織切片（tissue?section）中的諸如蛋白質和肽（peptide）的生物物質的二維分布狀態的圖像的方法。

背景技術

已知有這樣的分析方法（美國專利N_o.7446309）：該分析方法使用飛行時間（time-of-flight）二次離子質譜分析儀（TOF-SIMS）、基于信號強度將在腫瘤組織中表現（express）的蛋白質的表現量全面地（comprehensively）可視化。

此外，使用標準材料的質譜分析的信號強度的歸一化是已知的。在蛋白質分析中，通過二維電泳（electrophoresis）來分離蛋白質并且通過質譜分析來分析所分離的蛋白質。然后，使用具有已知含量的蛋白質的強度作為標準，將所關心的蛋白質的強度歸一化以獲得定量（quantitative）的結果。

可通過使用諸如TOF-SIMS和基質輔助激光脫附離子化質譜分析（matrix-assisted?laser?desorption-ionization?mass?spectrometry,MALDI-MS）而基于目標蛋白質的信號強度形成目標蛋白質的二維分布圖像。在這種情況下，已知有這樣的方法：該方法使用一次離子的總劑量、脈沖激光的照射量、或者得到的二次離子的總計數作為標準而將信號強度歸一化。

還提出了使用外部標準材料的歸一化。這里，外部標準材料指的是不包含于測量樣本中但被添加到樣本中的、用于將通過質譜分析而獲得的質量信號強度歸一化的標準材料。在日本專利申請公開No.2004-037120中示出了在TOF-SIMS中使用外部標準材料。在該公布中，用作外部標準的材料被布置在樣本的測量范圍之外。然后，通過外部標準的信號強度將樣本中的所關心的蛋白質的信號強度歸一化。通過該方法，可以在相同條件下獲得樣本和外部標準的信號強度。

在MALDI-MS中使用外部標準材料也是已知的。例如，一定量的特定的肽與基質劑混合并且基質被均勻地噴涂于樣本表面上以便使用所述肽作為外部標準以獲得組織切片的構成物的質譜的二維分布圖像是已知的。

還提出了使用內部標準的歸一化。這里，內部標準材料指的是事先包含于測量樣本中的用于將通過質譜分析獲得的質量信號強度歸一化的標準材料。例如，在S.G.Ostrowski?et?al.,Anal.Chem.79，3554（2007）中，使用從細胞的脂質（lipid）成分獲得的碎片離子（fragmention）的信號強度作為標準，將細胞膜表面中的膽固醇（cholesterol）的信號強度歸一化，以通過TOF-SIMS形成二維分布圖像。

發明內容

在日本專利申請公開No.2004-037120中，由于外部標準材料被布置在離開目標構成物的位置中，因此難以校正由局部地存在于測量范圍中的諸如鹽和脂質的離子化抑制物質導致的局部靈敏度（sensitivity）變化。

在S.G.Ostrowski?et?al.,Anal.Chem.79，3554（2007）中，培養的細胞經受二維分布測量，并且，使用細胞膜上的脂質分子的碎片離子（C₅H₉⁺）的信號作為圖像中的每個像素中的內部標準。但是，用于內部標準的脂質分子根據細胞膜的形狀具有偏倚的（biased）二維分布。例如，在組織切片的細胞外部或核中，很少存在脂質分子。因此，歸一化信號被計算為比與實際豐度（abundance）對應的信號高的值。出于這種原因，當形成二維分布圖像時，難以形成適當地反映測量對象的豐度的圖像。

作為用于解決上述問題的深入研究的結果，本發明的發明人實現了本發明。