[發明專利]一種單子葉植物的組織培養方法

有效

• 申請號: 201410046615.8
• 申請日: 2014-02-10
• 公開（公告）號: CN103766221A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 張萬軍;劉燕蓉;馬寧;葉文興;張蘊薇
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種獲得單子葉植物II型愈傷組織的方法，包括如下步驟：

（1）以單子葉植物的成熟種子為外植體，接種于愈傷組織誘導培養基上，25±2℃避光誘導培養4-6周，獲得愈傷組織1；

（2）從步驟（1）獲得的愈傷組織1剝去最外層的白色愈傷組織，取內部黃色的胚性愈傷組織，接種于愈傷組織繼代培養基上，25±2℃避光條件下繼代培養3周，獲得愈傷組織2；

（3）從步驟（2）獲得的愈傷組織2中選取在所述繼代培養的3周時間內體積增大60%以上的愈傷組織；即為II型愈傷組織。

2.一種單子葉植物的組織培養方法，包括如下步驟：

（1）以單子葉植物的成熟種子為外植體，接種于愈傷組織誘導培養基上，25±2℃避光誘導培養4-6周，獲得愈傷組織1；

（2）將步驟（1）獲得的愈傷組織1剝去最外層的白色愈傷組織，取內部黃色的胚性愈傷組織，接種于愈傷組織繼代培養基上，25±2℃避光條件下繼代培養3周，獲得愈傷組織2；

（3）從步驟（2）獲得的愈傷組織2中選取II型愈傷組織接種于分化培養基上，25±2℃光照培養4周，光照周期為16h/黑暗8h，光照強度為200μmol?m^-2s^-1，獲得再生芽；

所述II型愈傷組織為在繼代培養的3周時間內體積增大60%以上的愈傷組織；

（4）將步驟（3）獲得的再生芽接種生根培養基上，25±2℃生根培養2周，光照周期為16h/黑暗8h，光照強度為200μmol?m^-2s^-1，獲得再生苗。

3.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述愈傷組織誘導培養基為MB固體培養基或MS7固體培養基或NB7固體培養基；或

所述愈傷組織繼代培養基為固體MP培養基；或

所述分化培養基為REG固體培養基；或

所述生根培養基為1/2MS固體培養基。

4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于：

所述MB固體培養基是在MS固體培養基中加入麥芽糖、2,4-D和6-BA后得到的培養基；所述MB固體培養基中麥芽糖的終濃度為30g/L、2,4-D的終濃度為5mg/L、6-BA的終濃度為1mg/L；

所述MS7固體培養基是在MS固體培養基中加入麥芽糖和2,4-D后得到的培養基；所述MS7固體培養基中麥芽糖的終濃度為30g/L、2,4-D的終濃度為7mg/L；

所述NB7固體培養基的溶劑為水，溶質及其濃度如下：硝酸鉀2830mg/L，硫酸銨463mg/L，二水合氯化鈣166mg/L，七水合硫酸鎂185mg/L，磷酸二氫鉀400mg/L，七水合硫酸亞鐵27.8mg/L，四水合硫酸錳4.4mg/L，七水合硫酸鋅1.5mg/L，硼酸1.6mg/L，碘化鉀0.8mg/L，Na₂·EDTA·2H₂O37.3mg/L，肌醇100mg/L，煙酸1mg/L，鹽酸吡哆醇1mg/L，鹽酸硫胺素10mg/L，麥芽糖30g/L，水解酪蛋白500mg/L，脯氨酸500mg/L，2,4-D7mg/L，植物凝膠4.0g/L；

所述MP固體培養基是在所述MB固體培養基中加入終濃度為2g/L的脯氨酸后得到的培養基；

所述REG固體培養基是在MS固體培養基中加入NAA、GA、6-BA和麥芽糖后得到的培養基；所述REG固體培養基中NAA的終濃度為0.2mg/L、GA的終濃度為0.5mg/L、6-BA的終濃度為1mg/L、麥芽糖的終濃度為30g/L；

所述1/2MS固體培養基為將MS固體培養基中的大量元素組分濃度減半其余組分濃度不變，再加入麥芽糖后得到的培養基；所述1/2MS固體培養基中麥芽糖的終濃度為30g/L。

5.根據權利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步驟（1）中，將作為外植體的所述成熟種子接種于所述愈傷組織誘導培養基上，為如下（a1）或（a2）：

（a1）將所述成熟種子直接接種于所述愈傷組織誘導培養基；

（a2）將所述成熟種子的盾片縱切后接種于所述愈傷組織誘導培養基。