[發明專利]一種干擾HIP-55的siRNA及其在抗腫瘤中的應用

有效

• 申請號: 201410046020.2
• 申請日: 2014-02-08
• 公開（公告）號: CN103773768A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 李子健;付海安;石智;李增剛
• 申請（專利權）人: 北京大學第三醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/861;C12N5/10;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種干擾HIP-55的siRNA及其在抗腫瘤中的應用。

背景技術

HIP-55(hematopoietic?progenitor?kinase1[HPK1]-interacting?protein?of55?kDa；也稱為drebrin-like?protein?DBNL、mAbp1或SH3P7)是一個包含多功能域的蛋白質。其結構主要包含著N端的F-actin蛋白結合結構域和C端SH3結構域。HIP-55參與突觸發生、受體內吞、骨架重排及信號轉導。目前對HIP-55功能了解較少，已知HIP-55通過調節T細胞受體內吞、細胞因子釋放和B細胞受體呈遞等在免疫系統起著重要作用。最近研究表明HIP-55通過與N-WASP和Arp2/3相互作用在神經系統中調節骨架重排。但其在腫瘤中的作用均尚無研究。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種干擾HIP-55的siRNA。

本發明提供的siRNA，其核苷酸序列為序列表中序列3。

編碼上述siRNA的DNA分子也是本發明保護的范圍。

上述DNA分子的核苷酸序列為序列表中序列5。

含有上述DNA分子的轉基因細胞系或重組腺病毒也是本發明保護的范圍。

HIP-55蛋白抑制劑在制備具有如下1）-7）中至少一種功能的產品中的應用也是本發明保護的范圍：

1）抑制細胞增殖；

2）促進細胞凋亡；

3）抑制腫瘤細胞遷移；

4）抑制腫瘤細胞侵襲；

5）抑制腫瘤細胞克隆形成；

6）抑制腫瘤形成；

7）預防和/或治療腫瘤；

所述HIP-55蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2。

上述應用中，所述HIP-55蛋白抑制劑為上述siRNA、上述DNA分子或上述轉基因細胞系或重組腺病毒。

上述應用中，所述產品為藥物。

上述應用中，所述腫瘤為肺癌；

所述腫瘤細胞為腫瘤細胞；所述腫瘤細胞具體為肺癌細胞。。

上述應用中，所述肺癌細胞為人非小細胞肺癌細胞。

本發明的實驗證明，本發明發現HIP-55在臨床肺癌病人組織樣本中明顯高表達，進一步研究表明HIP-55的功能：通過RNA干擾沉默HIP-55蛋白，可以明顯抑制腫瘤形成、促進凋亡、抑制增殖、細胞克隆形成、細胞遷移和/或細胞侵襲，可用來制備預防和/或治療腫瘤產品。

附圖說明

圖1為RNA干擾HIP-55的細胞中蛋白表達

圖2為過表達HIP-55的細胞中蛋白表達

圖3為RNA干擾HIP-55的細胞增殖

圖4為過表達HIP-55的細胞增殖

圖5為HIP-55對肺癌細胞A549凋亡的影響

圖6為HIP-55對細胞凋亡標記物的影響

圖7為HIP-55對細胞克隆形成能力的影響

圖8為劃痕試驗檢測HIP-55對細胞遷移的影響

圖9為Transwell檢測HIP-55對細胞遷移的影響

圖10為HIP-55對細胞侵襲影響

圖11為HIP-55對成瘤的影響

圖12為HIP-55在肺癌患者組織樣本中高表達

具體實施方式

下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。

下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。

下述實施例中定量實驗均重復三次，結果取平均值。

下述實施例中Anti-HIP-55抗體購自BD?Bioscience(San?Diego,CA)。

下述實施例中人非小細胞肺癌A549（美國ATCC，產品目錄號CCL-185^TM）在含有10%胎牛血清、100U/ml青霉素、100U/ml鏈霉素的高糖DMEM的培養液中培養，并放置在37℃、5%濃度的二氧化碳培養箱中。A549細胞經過消化傳代，取對數生長期細胞待用。

人HIP-55蛋白的氨基酸序列為序列表中的序列2，編碼該蛋白的基因的核苷酸序列為序列表中的序列1。

實施例1、過表達HIP-55的A549細胞和敲減HIP-55的A549細胞的構建

一、HIP-55siRNA的獲得