[發明專利]基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法

有效

• 申請號: 201410045586.3
• 申請日: 2014-02-08
• 公開（公告）號: CN103740855A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發明（設計）人: 陳文炳;邵碧英;繆婷玉;彭娟
• 申請（專利權）人: 福建出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種DNA條形碼引物，其特征在于：所述DNA條形碼引物的核苷酸序列為：

EEL?244-F：?CCTGTTCC?TCGTGGGGGC?TTTT；

EEL?244-R：?ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG。

2.一種基于DNA條形碼的鰻魚物種鑒別方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

（1）鰻魚DNA提取；

（2）利用DNA條形碼引物進行PCR擴增，擴增出244?bp的產物，所述DNA條形碼引物為EEL?244-F：?CCTGTTCC?TCGTGGGGGC?TTTT，?EEL?244-R：?ATGGCATAACGAGGGTTTAACTG；

（3）進行物種鑒別的序列特征比對，其中，是按下表所示的核苷酸序列特征變異位點進行物種鑒別：

。

3.根據權利要求2所述的針對日本鰻、美洲鰻和歐洲鰻的物種鑒別方法，其特征在于：步驟（2）所述PCR擴增的條件為：94℃預變性3?min，94℃變性30?s，45℃退火30?s，72℃延伸60?s，5個循環；94℃變性30?s，51℃退火60?s，72℃延伸60?s，35個循環；72℃延伸10?min；反應體系為：10?×?Taq?buffer?2.5?μL，Taq酶1.0?U，模板DNA?200?ng，MgCl₂?3.5?mmol/L，dNTPs?300?μmol/L，上游引物0.5?μmol/L，下游引物0.5?μmol/L，用ddH₂O將總體積補至25μL。