[發明專利]用于花生種植的微生物菌肥及其制備方法

有效

• 申請號: 201410045048.4
• 申請日: 2014-02-07
• 公開（公告）號: CN103819267A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發明（設計）人: 豐來;呂黎;羅志威;郭帥;周艷;王蕾;粟靜
• 申請（專利權）人: 湖南泰谷生物科技股份有限公司
• 主分類號: C05G3/00
• 分類號: C05G3/00;C05F11/08;A01C21/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君

1.一種用于花生種植的微生物菌肥，其特征在于，由如下重量份的組分組成：復合微生物菌劑5-25、粕類復合粉30-65、淀粉5-20和膨潤土10-25；

其中，所述復合微生物菌劑由枯草芽孢桿菌菌劑、沼澤紅假單胞菌菌劑、哈茨木霉菌劑和淡紫擬青霉菌菌劑組成，四種菌劑的質量比為5:2:1:2，所述復合微生物菌劑的總有效活菌數為100億cfu/g。

2.根據權利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌菌劑中枯草芽孢桿菌（Bacillus?subtilis）ACCC10118的有效活菌數為100億cfu/g，所述沼澤紅假單胞菌菌劑中沼澤紅假單胞菌（Rhodopseudomonas?palustris)ACCC10649的有效活菌數為40億cfu/g，所述哈茨木霉菌劑中哈茨木霉（Trichoderma?harzianum）ACCC31707的有效活菌數為20億cfu/g，所述淡紫擬青霉菌菌劑中淡紫擬青霉菌（Paecilomyces?lilacinus）ATCC20079的有效活菌數為40億cfu/g。

3.根據權利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述粕類復合粉為豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按照等質量比混合后經過微生物發酵、腐熟后干燥、粉碎、過篩后所得粉狀有機質；

發酵制備所述粕類復合粉所使用的微生物為枯草芽孢桿菌、哈茨木霉和米曲霉。

4.根據權利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述淀粉為過80目篩的玉米淀粉。

5.根據權利要求1所述的微生物菌肥，其特征在于，所述膨潤土過300目篩，其中SiO₂含量為70%。

6.根據權利要求1-5任一項所述的微生物菌肥，其特征在于，所述微生物菌肥為粉劑。

7.權利要求3-6任一項所述微生物菌肥的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）單一菌劑的制備

枯草芽孢桿菌菌劑的制備：

a.斜面培養：將枯草芽孢桿菌菌種在無菌條件下接種于斜面培養基上，在35-37℃條件下培養36-48小時；所述斜面培養基為：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g、牛肉膏3-5g、氯化鈉2g、瓊脂粉16g和水1000mL，pH7.0-7.5；

b.搖床培養：將步驟a培養的菌種在無菌條件下接種于搖瓶培養基中，在35-37℃，180-200r/min條件下振蕩培養12-18小時；所述搖瓶培養基為：葡萄糖10-15g、蛋白胨5-7g牛肉膏3-5g、酵母膏1-3g、磷酸二氫鉀2.5g、硫酸鎂5g和水1000mL，pH7.0-7.5；

c.發酵罐培養：將步驟b培養的菌種在無菌條件下接種于發酵培養基中，在罐壓0.5kg、溫度35-37℃、通氣量1:0.8-1.0、轉速180-200r/min的條件下，發酵培養36-48小時后，當80%菌體成為芽孢時出罐，得到發酵液；所述發酵培養基為：蔗糖30-45g、豆粕粉20-25g、蛋白胨10-15g、硫酸銨5g、魚粉5-7g、硫酸鎂5g、硫酸錳3g、磷酸二氫鉀2.5g、碳酸鈣1.5g和水1000mL，pH7.5-8.0；

d.將步驟c中得到的發酵液經濃縮后，按適當比例與載體谷殼粉混合干燥制備成孢子粉，獲得有效活菌數為100億cfu/g的枯草芽孢桿菌孢子粉，即為枯草芽孢桿菌菌劑；

沼澤紅假單胞菌菌劑的制備：

e.斜面培養：將沼澤紅假單胞菌菌種在無菌條件下接種于斜面培養基上，在30℃、光照強度為5000Lx條件下培養2-3天；所述斜面培養基為：酵母膏0.2-0.5g、硫酸銨0.5-2g、磷酸氫二鉀0.5g、氯化鈉0.5g、氯化鈣0.1g、瓊脂粉16g和水1000mL，pH6.0；

f.種子液制備：將步驟e培養的菌種在無菌條件下接種于種子培養基中，在溫度為28-30℃，光照強度為5000Lx條件下，靜置培養72小時；所述種子培養基為：酵母膏0.5-1g、硫酸銨0.5-2g、磷酸氫二鉀0.5g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈉0.5g、硫酸鎂0.5g、氯化鈣0.1g和水1000mL，pH6.0；

g.擴大培養：將步驟f培養的菌種在無菌條件下接種于發酵培養基中，溫度為25-30℃、光照強度為5000-6000Lx條件下，靜置發酵培養5-7天后，待發酵液呈棕紅色時結束發酵，得到發酵液；所述發酵培養基為：酵母膏1.0-2.0g、丙酸鈉1.5-3.0g、硫酸銨2.5-3.0g、磷酸氫二鉀0.5g、磷酸二氫鉀0.5g、氯化鈉0.5g、硫酸鎂0.5g、氯化鈣0.1g和水1000mL，pH6.0；

h.將步驟g中得到的發酵液低速離心濃縮、按照適當比例與載體谷殼粉混合干燥制備成菌粉，獲得有效活菌數為40億cfu/g的沼澤紅假單胞菌菌粉，即為沼澤紅假單胞菌菌劑；

哈茨木霉菌劑的制備：

i.將哈茨木霉菌種在無菌條件下接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養基上，在26-28℃條件下培養96小時；

j.搖床培養：將步驟i培養的菌種在無菌條件下接種于裝有200mL無菌營養液的500mL三角瓶中，置于搖床中，于26-28℃，120-150r/min條件下振蕩培養18-24小時；所述無菌營養液為：硫酸銨2.5g、葡萄糖5g和水1000mL；

k.固體發酵產孢：將步驟j的哈茨木霉菌懸液接種到固體發酵培養基，進行固體發酵培養6-8天，90%產孢時，收獲發酵產物；所述固體發酵培養基為：玉米粉、麩皮和營養液按5:15:12的質量比混合；所述營養液為：蔗糖12-20g、硫酸鎂1.5g、硫酸錳1.5g，水1000mL，自然pH；

l.將步驟k中發酵產物置于熱循環烘箱內30℃烘干后粉碎，按照適當比例與載體谷殼粉混合制備成菌劑，獲得有效活菌數為20億cfu/g的哈茨木霉孢子粉，即為哈茨木霉菌劑；

淡紫擬青霉菌菌劑的制備：

m.將淡紫擬青霉菌菌種在無菌條件下接種于馬鈴薯葡萄糖斜面培養基上，在25-28℃條件下培養96小時；

n.孢子懸浮液：將步驟m培養的菌種，在無菌條件用無菌水配制成孢子懸浮液；

o.液體發酵：將步驟n的淡紫擬青霉菌孢子懸浮液接種到液體發酵培養基中，在25-28℃、通氣量1:0.8-1.0、轉速120-150r/min的條件下，發酵罐發酵培養2天，即得到淡紫擬青霉菌液體菌種，0.05MPa保壓，準備用于固體發酵接種；所述液體發酵培養基為：豆粕粉25-30g、蔗糖15-20g、硫酸銨5g、硫酸鐵0.5g、硫酸錳0.2g、硫酸鋅0.05g、硫酸銅0.05g、氯化鈷0.3g，水1000mL，pH5-6；

p.固體發酵產孢：將步驟o的淡紫擬青霉菌液體種子接種到固體發酵培養基，進行固體發酵培養5-6天，90%產孢時，收獲發酵產物；所述固體發酵培養基為：豆粕粉、麩皮和營養液按1:3:2的質量比混合；所述營養液為：淀粉15-25g、葡萄糖10-15g、硫酸銨3g、硫酸鐵0.5g、硫酸鎂1g，水1000mL，自然pH；

q.將步驟p中發酵產物置于熱循環烘箱內30℃烘干后粉碎，按照適當比例與載體谷殼粉混合制備成菌劑，獲得有效活菌數為40億cfu/g的淡紫擬青霉菌孢子粉，即為淡紫擬青霉菌菌劑；

（2）復合微生物菌劑的制備：將步驟（1）中制備的枯草芽孢桿菌菌劑、沼澤紅假單胞菌菌劑、哈茨木霉菌劑和淡紫擬青霉菌菌劑按照5:2:1:2的質量比混勻，水分控制在10%以內，即得復合微生物菌劑；

（3）粕類復合粉的制備：將豆粕、菜籽粕和芝麻粕，按等質量比混合得粕類混合物，向其中添加有機物料腐熟劑混勻堆漚發酵，水分控制在60%；其中有機物料腐熟劑與粕類混合物的質量比為1：50；所述有機物料腐熟劑為枯草芽孢桿菌、哈茨木霉和米曲霉的混合菌劑，混合菌劑中總有效活菌數為5億cfu/g；

發酵過程中對溫度和時間進行控制，開始發酵時采用塑料膜覆蓋堆漚物，當漚堆15cm以下的溫度上升至50℃時將塑料膜揭開，該過程為3天；當漚堆15cm以下的溫度上升至60℃時啟動翻堆機進行翻堆，如此反復操作，50天后，豆粕、菜籽粕和芝麻粕徹底腐熟，腐熟后風干、粉碎、過篩，即得粕類復合粉；

（4）微生物菌肥的制備：按比例稱取復合微生物菌劑、粕類復合粉、淀粉和膨潤土，混勻后即得用于花生種植的微生物菌肥。