[發明專利]寡肽CD04及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 201410044222.3
• 申請日: 2014-01-30
• 公開（公告）號: CN104817622A
• 公開（公告）日: 2015-08-05
• 發明（設計）人: 陳光健
• 申請（專利權）人: 陳光健
• 主分類號: C07K5/097
• 分類號: C07K5/097;C07K1/06;C07K1/04;A61K38/06;A61P29/00;A61P17/02;A61P1/04;A61P37/04;A23L1/305
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于蛋白質領域，特別涉及寡肽及其應用。

背景技術

寡肽是多肽的一種分類，分子量段一般在1000道爾頓以下,也稱作小肽,一般由2--6個氨基酸組成。

炎癥是具有血管系統的活體組織對損傷因子所發生的防御反應。對機體的損傷的局部組織所呈現的反應稱為炎癥反應，炎癥發展后期會產生滲出液，滲出物的壓迫和炎癥介質的作用可引起患者疼痛?，F在抗炎的臨床應用藥物主要為化學合成藥物,如萘丁美酮、吲哚美辛、吡羅昔康、布洛芬等,這些化學藥物雖然抗炎效果明顯,但不能治本,不能消除致炎的基本原因,大多都有較嚴重的不良反應，給患者造成痛苦和損失。

創面修復，創面是正常皮膚（組織）在外界致傷因子如外科手術、外力、熱、電流、化學物質、低溫以及機體內在因素如局部血液供應障礙等作用下所導致的損害。常伴有皮膚完整性的破壞以及一定量正常組織的丟失，同時，皮膚的正常功能受損。也稱為傷口或者創傷。創面修復既傷口修復。

消化道潰瘍病，胃潰瘍、十二指腸潰瘍統稱為消化道潰瘍病。由于生活節奏加快，工作壓力加大，近年消化道潰瘍病的發病率不僅未見下降，反有上升趨勢。近10多年來本病的癥狀也變得不典型，無規律的胃部隱痛常引不起人們的注意，直到發生嘔血或黑便時方到醫院就診。消化性潰瘍主要指發生在胃和十二指腸的慢性潰瘍，亦可發生于食管下段、胃空腸吻合口周圍及含有異位胃粘膜的美克爾（MECKEL）憩室。這些潰瘍的形成與胃酸和胃蛋白酶的消化作用有關，故稱消化性潰瘍。近年研究發現潰瘍的形成與幽門螺旋桿菌（ＨＰ）的存在有關。本病絕大多數（95％以上）位于胃和十二指腸，故又稱胃十二指腸潰瘍。本病的總發病率占人口的5-10％，十二指腸潰瘍較胃潰瘍多見，以青壯年多發，男多于女，兒童亦可發病，老年患者所占比例亦逐年有所增。由于復發率很高，給患者帶來痛苦。

免疫力是人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物（病毒、細菌等）；處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染細胞的能力。現代免疫學認為，免疫力是人體識別和排除“異己”的生理反應。年老體弱的人員由于自身免疫系統較弱，所以需要提高細胞的識別能力。免疫力低下是會造成人體容易受到外界的感染，功能下降。

發明內容

為了尋找一種可以多角度保護人體創面和抗炎鎮痛，同時提高人體免機能的藥物，發明人通過大量合成試驗，廣泛的篩選，采用Fmoc保護的氨基酸來合成，得到大量寡肽分子，其中部分寡肽分子獲得了意想不到的技術效果。意外地發現治療效果較好的寡肽CD04，其由Y、E、H3個氨基酸殘基組成，分子量為447.45Da，其氨基酸序列如SEQ?ID:1所示。

上述寡肽的制備方法可以使用合成，也可以采用從生物體中提取純化得到。寡肽的制備方法，其特征在于包括如下的步驟：

a.合成順序為從C端到N端;取1倍摩爾當量的樹脂放入多肽合成儀反應器中，加入DCM(二氯甲烷)溶脹半小時，然后抽掉DCM，加入序列中第一個Fmoc保護的氨基酸10mmol，2倍摩爾當量的DIEA(二異丙基乙胺)，適量的DMF(二甲基甲酰胺)、DCM溶液（適量是指以可使樹脂充分鼓動起來為宜），用氮氣鼓泡反應60min；然后加入約5倍摩爾當量甲醇，反應半小時，抽掉反應液，用DMF、甲醇洗凈;

b.加入適量哌啶去除Fmoc（9-芴甲氧羰基）保護基，洗凈，茚三酮檢測；

c.往反應器中加入序列中第二個氨基酸（也為2倍摩爾當量），2倍摩爾當量HBTU（苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽）及DIEA，氮氣鼓泡反應半小時，抽掉液體，用DMF,甲醇洗凈，茚三酮檢測;

d.重復依步驟b、c的方式依次加入序列中氨基酸，抽掉液體，用DMF洗凈，茚三酮檢測;

e.將樹脂用氮氣吹干后，從反應柱中取下并稱取重量，倒入燒瓶中，然后往燒瓶中加一定量的95%TFA（三氟乙酸）切割液，震蕩反應2h，目的是將多肽從樹脂載體上裂解下來并去除氨基酸的側鏈保護基團；

f.濾掉樹脂，得到濾液，然后向濾液中加入大量乙醚，析出粗產物，然后離心，清洗即可得到該序列的粗產物；

g.分析提純和質譜檢測：用ESI（電噴霧電離）離子源質譜儀和測序儀檢測該序列的正確性，用高效液相色譜將粗品提純至要求純度；

h.收集純化好的目標寡肽溶液放入凍干機中進行濃縮，凍干成白色粉末。