[發明專利]一種菌絲霉素突變體及其基因、制備方法和應用

有效

• 申請號: 201410043713.6
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN104804074B
• 公開（公告）日: 2018-01-16
• 發明（設計）人: 胡又佳;謝麗萍;張琪;陳習平;朱寶泉;龔桂花
• 申請（專利權）人: 上海醫藥工業研究院;中國醫藥工業研究總院
• 主分類號: C07K14/37
• 分類號: C07K14/37;C12N15/31;C07K19/00;C12N15/62;C12P21/02;A61K38/16;A61K47/42;A61P31/04
• 代理公司: 上海弼興律師事務所31283
• 代理人: 朱水平,沈利

技術領域

本發明屬于生物工程領域，特別涉及一種菌絲霉素（Plectasin）的突變體多肽及其基因、制備方法和應用。

背景技術

尋找新型抗菌制劑已成為一個迫在眉睫的問題，防御素以其獨特的抗菌機制，抗菌譜廣和不易產生耐藥性以及來源安全等優點，日益受到人們的重視，成為傳統抗生素的理想替代品。2005年，Mygind等（Mygind PH,Fischer RL,Schnorr KM,et al.Plectasin is a peptide antibiotic with therapeutic potential from a saprophytic fungus[J].Nature,2005,437(7061):975-980.）從腐生子囊菌中分離得到了菌絲霉素，被認為是首例真菌防御素，繼而引起了人們極大的關注。Schmitz J(Schmitz J,Holzgrabe U.Plectasin-a new peptide antibiotic with high therapeutic potential[J].Pharm Unserer Zeit,2010,39(5):336-338.)通過研究發現，菌絲霉素是通過干擾細菌細胞壁的合成來抑制或殺死細菌，對革蘭氏陽性菌抑菌效果明顯。研究發現，菌絲霉素在生理條件下就有很高的活性；血清穩定性好，半衰期可延長，不易刺激細胞產生炎癥反應；對哺乳動物細胞的毒害性小；最小抑菌濃度和最小殺菌濃度幾乎相同，能快速殺滅細菌；與萬古霉素作用于細胞壁的方式不同，不會產生交叉耐藥性，因此，菌絲霉素可以作為一種具有治療革蘭氏陽性菌巨大潛能的小肽抗生素。本實驗室(梁文,胡又佳,朱寶泉等.菌絲霉素的高效表達、純化及活性[J].中國醫藥工業雜志,2013,44(1):21-26.)在前期研究中成功構建了一株菌絲霉素的表達載體pYG330，實現了菌絲霉素融合蛋白在大腸桿菌中的高效表達，但其抑菌活性還有待進一步的提高。

發明內容

因此本發明要解決的技術問題就是：針對現有的菌絲霉素融合蛋白的抑菌活性較低的缺陷，提供了一種新的菌絲霉素突變體及其基因、制備方法和應用。

為解決上述技術問題本發明所采用的技術方案之一為：一種菌絲霉素突變體，其所述菌絲霉素突變體的氨基酸序列如序列表中SEQ ID No:2所示。

本發明所述菌絲霉素突變體的氨基酸序列的制備方法為本領域常規制備方法，所述菌絲霉素突變體的氨基酸序列的制備方法較佳地為通過表達分離純化制備或者通過人工合成氨基酸序列制備即得。本發明所述菌絲霉素突變體的氨基酸序列優選地為（如序列表中SEQ ID NO:2所示）：

GFCGNGPWDEDDMQCHNHCKSIKGYKGGYCDKGGFVCKCY。

為解決上述技術問題本發明所采用的技術方案之二為：一種菌絲霉素突變體的編碼基因，其所述基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID No:3所示。

本發明所述菌絲霉素突變體的基因的核苷酸序列的制備方法為本領域常規制備方法，所述菌絲霉素突變體的基因核苷酸序列的制備方法較佳地包括聚合酶鏈式反應（PCR）擴增制備，或者人工合成該核苷酸序列制備即得，本發明所述菌絲霉素突變體的基因的核苷酸序列優選地為（如序列表中SEQ ID NO:3所示）：

5’-GGTTTTGGTTGCAACGGTCCGTGGGATGAAGATGATATGCAGTGCCACAACCACTGCAAATCTATCAAAGGTTACAAAGGTGGTTACTGTGATAAAGGTG GTTTTGTTTGCAAATGTTAC-3’。

為解決上述技術問題本發明所采用的技術方案之三為：一種菌絲霉素突變體融合蛋白，其中所述菌絲霉素突變體融合蛋白氨基酸序列從N端到C端依次為：保護肽段氨基酸序列，蛋白分離純化標簽氨基酸序列，蛋白酶的酶切位點氨基酸序列以及SEQ ID No:2所示的氨基酸序列。