[發明專利]基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針

有效

• 申請號: 201410043607.8
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN104805079B
• 公開（公告）日: 2019-04-05
• 發明（設計）人: 程超;左長京;張桉瑜;車莉萍;孫高峰;馮菲
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/6851
• 代理公司: 上海德昭知識產權代理有限公司 31204
• 代理人: 郁旦蓉

本發明提供了一種基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針，其特征在于，包括一組熒光定量PCR引物和探針：上游引物：5’?TCAGCTTCGTCTGCGTCTGT?3’；下游引物：3’?GCGGATAGCAGTCGATTCAAG?5’；以及用于PCR實時定量檢測的帶有熒光基團的堿基序列。本發明根據所選取的Shope病毒的DNA片段所設計的探針對于VX2腫瘤的發生及發展均具有極佳的指示作用。

技術領域

本發明涉及一種基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針，屬于分子生物學領域。

背景技術

使用裸鼠建立的腫瘤動物模型需要使用小動物專用的影像設備（比如animalPET/CT）去觀察腫瘤生長或放化療后改變。但是小動物成像設備比較昂貴，只在少數研究中心配備。而兔VX2腫瘤動物模型可以在臨床型（病人使用）的顯像設備上進行腫瘤觀察，因此有很多的學者使用VX2動物模型進行腫瘤學的研究。臨床上腫瘤性疾病的診斷和療效評價的非創傷性檢查，除影像手段之外，依靠多種特異性血清腫瘤標志物，如：癌胚抗原（CEA）、甲胎蛋白（AFP）、前列腺抗原（PSA）等，被廣泛使用。兔VX2腫瘤是Shope病毒在兔皮膚上誘發而產生的惡性鱗癌，可接種在兔的肝臟、肺臟、骨骼、肌肉和顱腦等處，是目前唯一可以制成的大型哺乳動物動物模型。目前觀察VX2腫瘤多使用影像方法，缺少一種高度特異性的生物標志物探針。

發明內容

為解決上述問題，本發明采用了如下技術方案，

本發明提供了一種基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針，其特征在于，包括：

上游引物：5’-TCAGCTTCGTCTGCGTCTGT-3’；

下游引物：3’-GCGGATAGCAGTCGATTCAAG-5’；以及用于PCR實時定量檢測的帶有熒光基團的堿基序列。

另外，本發明的基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針，還可以具有這樣 的特征：其中，帶有熒光基團的堿基序列為，

5’-FAM-CTCCAGAAGCCATAAGA-MGB-3’。

發明作用與效果

根據本發明的基于PCR技術的VX2腫瘤標志物探針，由于采用熒光定量PCR分子探針測定組織以及循環血中Shope病毒E區DNA片段含量，因此能夠作為指示兔VX2腫瘤標志物的探針。

附圖說明

圖1是本發明實施例的標準質粒的示意圖；

圖2是本發明實施例的標準質粒PCR絕對定量曲線；

圖3是本發明實施例的標準曲線；

圖4是本發明實施例的¹⁸FDGPET-CT檢查結果；

圖5是本發明實施例的腫瘤組織病理分析的結果；

圖6是Shope病毒DNA與FDGPET糖代謝值之間的相關性曲線；

圖7是Shope病毒DNA基因組的示意圖；

圖8是腫瘤組織Shope病毒DNA與循環血DNA的相關性曲線；以及

圖9是¹⁸FDG-PET的SUV_max值與腫瘤體積的相關性曲線。

具體實施方式

本實施例中未注明具體條件的實驗方法均按照生物化學或分子生物學常規實驗的常規條件（例如參考本領域可用的教科書，如《最新分子生物學方法》、《分子克隆實驗室手冊》等等）或按照制造廠商所建議的條件，利用生物化學或分子生物學常規實驗的常規試劑進行試驗。