[發(fā)明專利]一種基于Notch信號胞內(nèi)域NICD1構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410042777.4
• 申請日: 2014-01-29
• 公開（公告）號: CN103820498A
• 公開（公告）日: 2014-05-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉建;魏鉑沅;范金柱;楊柳;羅卓荊
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;A61K48/00;A61P19/10
• 代理公司: 西安通大專利代理有限責(zé)任公司 61200
• 代理人: 陸萬壽

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于hBMSCs誘導(dǎo)增殖分化技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種基于Notch信號胞內(nèi)域NICD1構(gòu)建的慢病毒表達(dá)載體及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

骨質(zhì)疏松癥是一種以骨量低下，骨微結(jié)構(gòu)損壞，導(dǎo)致骨脆性增加，易發(fā)生骨折為特征的全身性骨病。好發(fā)于55歲以上老年患者。《骨質(zhì)疏松癥防治中國白皮書》（2008年）指出，我國至少有6944萬人患有骨質(zhì)疏松，有2.1億人罹患低骨量即存在骨質(zhì)疏松癥的風(fēng)險。隨著我國人口老齡化加劇，預(yù)計到2020年我國骨質(zhì)疏松和低骨量患者將增加至2.8億。因此，研究骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病機制，預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松癥迫在眉睫。

目前骨質(zhì)疏松癥的研究，多是針對增強的破骨細(xì)胞骨吸收作用給予骨吸收抑制劑（雌激素、孕激素、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑、雙膦類藥物、降鈣素等），輔助以促進(jìn)成骨的礦化劑（鈣劑，活性維生素D等）。雖然雌激素補充替代（estrogen?replacement?therapy，ERT）對增加絕經(jīng)后骨量（bone?mineral?density，BMD）效果明顯，也能減少骨質(zhì)疏松癥患者骨折的發(fā)生率，但是其也增加了患者罹患乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生率，更因其可以對血脂代謝產(chǎn)生影響，增加了患者心肌梗塞、中風(fēng)、深靜脈血栓，肺栓塞的發(fā)生率。雙膦類（bisphosphonates，BP）藥物被破骨細(xì)胞吸收后干擾破骨細(xì)胞的多個生化過程，抑制骨吸收，可以增加骨量，降低脆性骨折的發(fā)生率。但其也存在著誘發(fā)視力模糊，食道、胃潰瘍，腎功能不全，血栓栓塞等并發(fā)癥的危險。維生素D可以促進(jìn)腸道、腎臟鈣的吸收，但單獨使用效果不理想。單純補鈣效果也不明顯，骨密度（BMD）僅能增加1.13％～2.05％，而且一旦停藥效果不能持續(xù)，且效果與劑量間關(guān)系不大。

最新的研究表明，骨質(zhì)疏松癥所引起的成骨活性減低，骨量減少常常伴發(fā)有骨髓中成脂活性增加，脂肪組織集聚。骨髓中成骨細(xì)胞和成脂細(xì)胞的共同祖細(xì)胞—骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（bone?marrow?mesenchymal?stem?cells，BMSCs）成脂分化增強，成骨分化減弱是導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的另一種主要機制。

BMSCs的分化同時受到成骨分化因子—Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2（Runx2）和成脂分化基因—過氧化物酶增殖體激活受體（peroxisome?proliferator-activ?ated?receptors，PPAR）調(diào)控。現(xiàn)有的研究表明，Runx2在骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bonemorphogenetic?protein，BMP）等上游分子的作用下促進(jìn)下游Osterix等分子的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)BMSCs分化為成骨細(xì)胞。而PPAR和CCAAT/增強子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer?binding?protein，C/EBP）等分子在其它調(diào)節(jié)因子的作用下促進(jìn)脂肪酸結(jié)合蛋白（fatty?acid-binding?protein，aP2）等下游基因的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)BMSCs成脂分化。

組蛋白去乙酰化酶（sirtuin?type1，SIRT1）被激活后能抑制PPARγ的生成，抑制BMSCs成脂分化（Wang?H，Qiang?L，F(xiàn)armer?SR.Identification?of?a?domain?within?peroxisome?proliferator-activated?receptor?gamma?regulating?expression?of?a?group?of?genes?containing?fibroblast?growth?factor21that?are?selectively?repressed?by?SIRT1in?adipocytes.Mol?Cell?Biol.2008;28（1）:188-200）。龐婷婷等提出可將SIRT1作為切入點，利用高表達(dá)SIRT1開展抑制BMSCs成脂、促進(jìn)成骨的研究，其實驗結(jié)果尚未見公開報道。Fan?Q等著眼于骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨與成脂分化平衡，選擇CCAAT/增強子結(jié)合蛋白（CCAAT/enhancer?binding?protein，C/EBP-α）為靶基因，研究它在細(xì)胞成骨-成脂轉(zhuǎn)分化過程中的調(diào)節(jié)作用。他們發(fā)現(xiàn)過表達(dá)C/EBPα可以抑制BMP-2誘導(dǎo)的C3H10T1/2細(xì)胞的成骨分化，進(jìn)而提出通過抑制C/EBPα的表達(dá)而達(dá)到促進(jìn)骨形成，抑制脂肪異常增生的研究，但其進(jìn)一步的實驗結(jié)果也未見報道。