[發(fā)明專利]一種促進(jìn)馬尾松組培繼代芽生根方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410041856.3
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103749310A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 姚瑞玲;吳幼媚;蔡玲
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧匯博專利代理有限公司 45114
• 代理人: 鄒超賢

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬植物繁殖技術(shù)領(lǐng)域，涉及組織培養(yǎng)育苗技術(shù)，尤其是一種促進(jìn)馬尾松組培繼代芽生根方法。

背景技術(shù)

馬尾松（Pinus?massonianan）原產(chǎn)我國，是我國南方重要的荒山綠化、造紙原料林和采脂林、自然風(fēng)景林的重要樹種之一，在我國分布范圍極為廣闊。作為一種綜合利用價值高、推廣潛力大的樹種，馬尾松不僅可用來生產(chǎn)三板、造紙及化纖工業(yè)制造，還可用來生產(chǎn)松香、松節(jié)油等工業(yè)原料。近年來，隨著人們?nèi)找嬖鲩L的生活需求與木材資源短缺和石油等不可再生資源逐漸枯竭等矛盾的激化，生態(tài)、經(jīng)濟(jì)和社會的可持續(xù)發(fā)展越來越受到社會關(guān)注。基于我國生態(tài)安生、資源安全與社會安全等問題，馬尾松作為我國主要的工業(yè)用材樹種和生物質(zhì)能源樹種之一，大力發(fā)展馬尾松人工林很有必要。

我國自“六五”國家科技攻關(guān)以來，在馬尾松良種選育和速生豐產(chǎn)栽培技術(shù)等方面取得了較大突破。目前，馬尾松良種主要以種子園和母樹林的有性繁殖為主。然而，有性繁殖存在著分化的問題，不能最大限度地提高遺傳改良增益，而無性繁殖卻能克服有性繁殖的上述不足。但馬尾松的傳統(tǒng)無性繁殖技術(shù)（扦插和嫁接）目前仍難滿足造林的需求，制約了馬尾松良種繁育的進(jìn)程?，F(xiàn)代林業(yè)發(fā)展講究速生豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)高效，植物組培技術(shù)的使用，是實(shí)現(xiàn)馬尾松優(yōu)良無性系苗木快速繁育的有效途徑。

馬尾松屬組織培養(yǎng)生根較為困難的樹種。以往眾多學(xué)者研究表明，以初代培養(yǎng)的馬尾松單芽進(jìn)行生根通常能獲得較為理想生根率，而經(jīng)過繼代以后，其單芽生根率明顯偏低。如以馬尾松成熟種子為外植體來源，吳小芹等（2009）和季孔庶等（2010）將經(jīng)過叢芽誘導(dǎo)和伸長的初代培養(yǎng)后單芽直接進(jìn)行生根，其生根率分別為85%和92.5%；而薛鷹（2006）在經(jīng)過繼代培養(yǎng)以后取單芽生根，其生根率僅為26.7%。要實(shí)現(xiàn)馬尾松組培苗工廠化生產(chǎn)，必須突破繼代芽生根困難瓶頸因素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的主要針對馬尾松組培繼代芽生根率低的現(xiàn)狀，為實(shí)現(xiàn)馬尾松組培苗規(guī)?；a(chǎn)，提供一種促進(jìn)馬尾松組培繼代芽生根方法。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

一種促進(jìn)馬尾松組培繼代芽生根方法，包括叢芽誘導(dǎo)、叢芽伸長、繼代培養(yǎng)、不定根誘導(dǎo)、不定根伸長、試管苗移栽的兩步生根法，獲得馬尾松組培繼代芽生根苗，其操作步驟如下：

（1）叢芽誘導(dǎo)：將馬尾松種子消毒后，在無菌條件下進(jìn)行種子萌發(fā)，然后截取帶0.5cm長下胚軸的無菌苗頂芽為外植體，在誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ⅰ中進(jìn)行叢芽誘導(dǎo)；

（2）叢芽伸長：將誘導(dǎo)出的叢生芽在伸長培養(yǎng)基Ⅱ中進(jìn)行伸長培養(yǎng)；

（3）繼代培養(yǎng)：將單個切下伸長芽的頂芽接種到繼代增殖培養(yǎng)基Ⅲ中進(jìn)行增殖，獲得繼代芽Ⅰ；將繼代芽Ⅰ重復(fù)步驟（2）進(jìn)行伸長，單個切下伸長的繼代芽Ⅰ并分成頂芽和帶側(cè)芽芽段，然后在步驟（3）繼代增殖培養(yǎng)基中繼續(xù)增殖獲得繼代芽Ⅱ，將繼代芽Ⅱ再重復(fù)步驟（2）和步驟（3），獲得新的增殖繼代芽；重復(fù)循環(huán)步驟（2）和（3），直至獲得大量足夠生根培養(yǎng)繼代芽；

（4）不定根誘導(dǎo)：單個切下生長健壯、半木質(zhì)化、高2-3cm的繼代芽，接種在含有吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、蔗糖的1/2改良MS培養(yǎng)基Ⅳ中，誘導(dǎo)處理不定根原基21-28d；

（5）不定根伸長：將具有肉眼可見不定根外植體轉(zhuǎn)入含有活性炭（AC）或抗壞血酸（Vc）、蔗糖的1/2改良MS培養(yǎng)基Ⅴ中，促進(jìn)不定根的表達(dá)與伸長；

（6）試管苗移栽：將已生根的再生植株移栽于黃泥土或泥炭土、蛭石和珍珠巖體積比為1∶1∶1的混合輕型基質(zhì)中培育，噴水保濕。

以上所述的培養(yǎng)基Ⅰ其原料含量為：6-BA2.5-4.0mg·L^-1、NAA0.1-0.3mg·L^-1、蔗糖30000mg·L^-1和改良MS培養(yǎng)基。

以上所述的培養(yǎng)基Ⅱ其原料含量為：NAA0.25-0.4mg·L^-1、蔗糖30000mg·L^-1和改良MS培養(yǎng)基。

以上所述的培養(yǎng)基Ⅲ其原料含量為：ZT1.0-3.0mg·L^-1、KT0-1.0mg·L^-1、NAA0-0.3mg·L^-1、蔗糖30000mg·L^-1和改良MS培養(yǎng)基。

以上所述的培養(yǎng)基Ⅳ其原料含量為：IAA1.0-2.5mg·L^-1、IBA0.1-0.5mg·L^-1、蔗糖1.0-2.0%和1/2改良MS培養(yǎng)基。