[發(fā)明專利]流感病毒為載體的HAdV嵌合疫苗的制備及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410041722.1
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103865923B
• 公開（公告）日: 2017-04-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊鵬輝;王希良;張紹庚;劉娜;段躍強;張培瑞;李志偉;王兆海
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍第三0二醫(yī)院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12N7/01;A61K39/145;A61K39/235;A61P31/16;A61P31/20
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,陳曉慶

1.SEQ ID No.1所示的DNA分子。

2.一種重組病毒，該病毒按照如下方法制備：

將分別含有冷適應(yīng)、減毒流感病毒的PB2基因、冷適應(yīng)、減毒流感病毒的PB1基因、冷適應(yīng)、減毒流感病毒的PA基因、冷適應(yīng)、減毒流感病毒的NP基因、冷適應(yīng)、減毒流感病毒的M基因和冷適應(yīng)、減毒流感病毒的NS基因的表達質(zhì)粒，以及分別含有靶標(biāo)流感病毒的HA基因和靶標(biāo)流感病毒的NA基因的表達質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，培養(yǎng)得到重組流感病毒；

其中，在所述冷適應(yīng)、減毒流感病毒的NS基因的開放讀碼框的自5’末端起第375位至第376位核苷酸之間插入HAdV的結(jié)構(gòu)蛋白基因，所述HAdV的結(jié)構(gòu)蛋白基因與所述冷適應(yīng)、減毒流感病毒的NS基因的開放讀碼框的自5’末端起第375位核苷酸之間連有5’-UAAUG-3’序列，所得序列為SEQ ID No.2中第41-1162位核苷酸所示；

或，將所述冷適應(yīng)、減毒流感病毒的M基因的開放讀碼框的自5’末端起第223位至第760位核苷酸替換為HAdV的結(jié)構(gòu)蛋白基因，所得序列為SEQ ID No.3中第40-759位核苷酸所示；

或，將所述靶標(biāo)流感病毒的NA基因的開放讀碼框的自5’末端起第184位至第1253位核苷酸替換為HAdV的結(jié)構(gòu)蛋白基因，所得序列為SEQ ID No.4中第35-650位核苷酸所示；

所述HAdV的結(jié)構(gòu)蛋白基因為HAdV的六鄰體蛋白塔區(qū)Loop1和Loop2的優(yōu)勢抗原表位基因的融合基因；

所述HAdV的六鄰體蛋白塔區(qū)Loop1和Loop2的優(yōu)勢抗原表位基因的融合基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的病毒，其特征在于：所述宿主細(xì)胞為MDCK、Vero、293T、COS細(xì)胞或MDCK/293T、MDCK/COS共培養(yǎng)的細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的病毒，其特征在于：所述HAdV為3型HAdV或7型HAdV。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的病毒，其特征在于：所述3型HAdV為HAdV-3病毒株VR-3；

所述7型HAdV為HAdV-7病毒株GZ08，GenBank accession No.GQ478341。

6.根據(jù)權(quán)利要求2-5任一所述的病毒，其特征在于：所述冷適應(yīng)、減毒流感病毒為冷適應(yīng)、減毒A型流感病毒或冷適應(yīng)、減毒B型流感病毒；

所述靶標(biāo)流感病毒為A型流感病毒或B型流感病毒。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的病毒，其特征在于：所述冷適應(yīng)、減毒A型流感病毒為H2N2亞型冷適應(yīng)、減毒流感病毒；所述A型流感病毒為H1亞型-H16亞型中的任意一種。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的病毒，其特征在于：所述H2N2亞型冷適應(yīng)、減毒流感病毒為冷適應(yīng)、減毒流感病毒株A/Ann Arbor/6/60(H2N2)；所述A型流感病毒為流感病毒株A/California/07/2009(H1N1)。

9.由權(quán)利要求2-8任一所述的病毒制備得到的嵌合疫苗。

10.權(quán)利要求1所述的DNA分子在制備預(yù)防和/或治療流感病毒和/或HAdV引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于：所述流感病毒為A型流感病毒或B型流感病毒。

12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于：所述A型流感病毒為H1亞型-H16亞型中的任意一種；

所述HAdV為3型HAdV或7型HAdV。

13.權(quán)利要求2-8任一所述的病毒在制備預(yù)防和/或治療流感病毒和/或HAdV引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的應(yīng)用，其特征在于：所述流感病毒為A型流感病毒或B型流感病毒。

15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于：所述A型流感病毒為H1亞型-H16亞型中的任意一種；

所述HAdV為3型HAdV或7型HAdV。

16.權(quán)利要求9所述的嵌合疫苗在制備預(yù)防和/或治療流感病毒和/或HAdV引起的疾病的產(chǎn)品中的應(yīng)用。