[發明專利]一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法

無效

• 申請號: 201410041574.3
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103834706A
• 公開（公告）日: 2014-06-04
• 發明（設計）人: 俞建國;俞亞磊;王斌
• 申請（專利權）人: 江蘇河海科技工程集團有限公司
• 主分類號: C12P17/18
• 分類號: C12P17/18;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法，其特征在于以金耳為出發菌株，通過試管斜面菌種、液體搖瓶菌種、種子罐菌種、發酵等步驟制得含有銀杏內酯B的發酵液，含有銀杏內酯B的發酵液經過乙酸乙酯萃取、濃縮、酒精復溶，－20℃結晶、過濾、烘干等提取工藝得到銀杏內酯B晶體。

2.根據權利要求書1所述的一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法，將金耳菌種切成4×4mm小塊菌種，挑取一小塊轉接含有馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基的試管中，20～32℃培養5～20天，制得試管斜面菌種，該試管斜面4℃保存備用；金耳試管斜面菌種切成4×4mm大小的小塊，挑取3～8塊轉接入裝有60～150mL馬鈴薯葡萄糖液體培養基的250mL的三角瓶中，三角瓶放置在恒溫振蕩培養箱中，20～32℃，80～150轉/分振蕩培養3～8天制得金耳液體搖瓶菌種；10～50瓶金耳液體搖瓶菌種接入裝有30～100L的馬鈴薯葡萄糖液體培養基和105～350mL豆油的種子罐中，在溫度20～32℃，通氣量0.3～1：1/分鐘（通氣氣體體積：培養基液體體積），攪拌轉速80～150轉/分鐘培養1～5天制得；60L種子罐菌種接入裝有180～1800L的含有0.1～3%的銀杏葉提取物的馬鈴薯葡萄糖液體培養基和630～6300L豆油的發酵罐中，在溫度20～32℃，通氣量0.3～1：1/分鐘（通氣氣體體積：培養基液體體積），攪拌轉速80～150轉/分鐘培養3～10天制得含有銀杏內酯B的發酵液；其中所述的馬鈴薯葡萄糖液體培養基為馬鈴薯200g，切成片狀、加入1000mL水，煮沸30分鐘，過濾，濾液定容至1000mL，根據試驗需要進行分裝，120℃滅菌30分鐘；其中所述的馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基為馬鈴薯液體培養基1000mL加入瓊脂20g，煮沸融化瓊脂，分裝試管，120℃滅菌30分鐘后，擺成斜面。

3.根據權利要求1所述的一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法，發酵液用鹽酸或硫酸調節pH?1.0～4.0，連續用0.3～3倍發酵液體積的乙酸乙酯萃取2～4次，合并乙酸乙酯萃取液，真空濃縮至干，殘渣用無水乙醇溶解，過濾，濾液至于-20℃結晶24～120小時，過濾，濾渣水洗，80℃干燥得到銀杏內酯B純品。

4.根據權利要求書1所述的一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法，銀杏葉提取物為國內任意以廠家生產的銀杏葉提取物，但是銀杏葉提取物中，總黃酮含量﹥24%,總內酯含量﹥6％。

5.根據權利要求1所述的一種金耳菌種轉化銀杏葉提取物獲取銀杏內酯B的方法，發酵提取工藝所制得的銀杏內酯B白色，內酯含量≧90%。