[發明專利]一種多氯聯苯降解菌的篩選方法及一株多氯聯苯降解菌

有效

• 申請號: 201410041265.6
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103789209A
• 公開（公告）日: 2014-05-14
• 發明（設計）人: 胡金星;沈超峰;崔靜嵐
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/02
• 分類號: C12N1/02;C12N1/20;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

1.一種多氯聯苯降解菌的篩選方法，其特征是：

1）從受多氯聯苯長期污染的區域采集污染土樣；

2）取土樣接種到以200～300mg/L聯苯為唯一碳源的無機鹽培養基進行馴化富集，并進行連續傳代培養；當無機鹽培養基中的聯苯顆粒能在24?h內消失、培養基顏色呈現無色到亮黃色再到淺黃色的變化過程時，將該培養基稀釋涂布于瓊脂平板并噴灑聯苯；挑取能導致瓊脂平板上出現透明圈或黃色暈圈的菌落劃線純化，得到初篩菌株；

3）考察初篩菌株的多氯聯苯降解能力。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

步驟2）中所述的馴化富集所用的無機鹽培養基為：KH₂PO₄?1.00?g/L，K₂HPO₄·3H₂O?3.00?g/L，MgSO₄?0.15?g/L，FeSO₄?0.01?g/L，CaCl₂?0.005?g/L，NaCl?1.00?g/L，(NH₄)₂SO₄?0.50?g/L，微量元素溶液0.1%?(v/v)，pH?7.2；所述的微量元素溶液配方為Na₂Mo₄·H₂O?6.70?g/L，ZnSO₄·5H₂O?28.00?g/L，CuSO₄·5H₂O?2.00?g/L，H₃BO₄?4.00?g/L，MnSO₄·5H₂O?4.00?g/L，CoSO₄·7H₂O?4.70?g/L，pH?7.2。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

步驟2）中所述的馴化富集條件為：180?r/min、30?°C恒溫培養3～6天。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

步驟2）中所述的傳代轉接的依據：當無機鹽培養基中的聯苯顆粒完全消失后，取該培養基按10%（v/v）的接種量接種到新鮮的無機鹽培養基中。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征是：

步驟2）中所述的馴化傳代次數的確定依據：當聯苯初始濃度為300?mg/L時，無機鹽培養基中聯苯顆粒能在24?h內消失、培養基顏色呈現無色到亮黃色再到淺黃色的變化過程時，表明培養基中聯苯降解菌的豐度較高，選擇此時的培養基進行稀釋涂布、分離菌株。

6.一株多氯聯苯降解菌，其特征是：菌株HC3拉丁名稱為Sphingobium?fuliginis，中文名稱為飛魚鞘氨醇菌；菌株HC3分離于浙江省臺州市路橋區某多氯聯苯污染土壤；菌株HC3為革蘭氏陰性菌，菌體呈桿狀，在LB平板上其菌落為淡黃色、呈圓形、表面濕潤；當2-氯聯苯、3-氯聯苯、2,4′-二氯聯苯、3,3′-二氯聯苯、2,4,4′-三氯聯苯和2,4′,5-三氯聯苯初始濃度為5～10?mg/L時，3天內降解率依次為100.00%、100.00%、97.19%、42.01%、32.34%和29.32%；當苯甲酸、3-氯苯甲酸和4-氯苯甲酸初始濃度為20-30?mg/L時，3天內降解率依次為100.29%、99.35%和100.56%；污染土壤中多氯聯苯初始濃度為18.60?mg/L時，接種菌株HC3能明顯促進一氯至四氯聯苯的降解，10天內總降解率達44.91%；菌株HC3已保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC），地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，郵政編碼：100101，保藏日期：2013年12月31日，保藏編號：CGMCC?No.8669。