[發明專利]一種基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的方法和試劑盒

無效

• 申請號: 201410041181.2
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103923973A
• 公開（公告）日: 2014-07-16
• 發明（設計）人: 王世亨
• 申請（專利權）人: 上海涌泰生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 上海伯瑞杰知識產權代理有限公司 31227
• 代理人: 吳瑾瑜

1.一種基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）制備數字PCR混合液：含有待檢測基因DNA模板的樣品、正向和反向檢測PCR擴增引物、標記TaqMan探針、PNA探針、正向和反向質控PCR引物、質控TaqMan探針以及PCR預混液混合，制備得到數字PCR混合液；

所述的正向和反向檢測PCR擴增引物用于擴增含有缺失突變的基因；所述的標記TaqMan探針與突變位點下游DNA模板結合；

所述的質控PCR引物用于擴增待檢測的DNA模板的保守序列；質控TaqMan探針與質控PCR引物所擴增的序列結合；

標記TaqMan和質控TaqMan探針是連接熒光基團和猝滅基團的核苷酸，兩者的熒光基團類型不同；

（2）數字PCR混合液制作PCR微反應液滴，再進行PCR擴增反應；

（3）收集信號并進行結果判斷：對PCR擴增反應后的產物進行信號收集，根據熒光信號的類型判斷則待測樣品中是否含有發生基因缺失突變的DNA模板及其數量和含量。

2.權利要求1所述基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的方法，其特征在于，所述熒光基團選自6-羧基熒光素、六氯-6-羧基熒光素、Cy5、Cy3或VIC，猝滅基團選自6-羧基四甲基若丹明、BHQ1、BHQ2或MGB。

3.權利要求1所述基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的方法，其特征在于，所述PNA探針與待檢測的基因發生突變的野生型DNA模板互補。

4.PNA探針用于制備基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述PNA探針與待檢測的基因發生突變的野生型DNA模板互補。

5.PNA探針用于基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變，其特征在于，所述PNA探針與待檢測的基因發生突變的野生型DNA模板互補。

6.標記TaqMan探針用于制備基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的試劑盒，其特征在于，所述的標記TaqMan探針與突變位點下游DNA模板結合。

7.標記TaqMan探針用于基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變，所述的標記TaqMan探針與突變位點下游DNA模板結合。

8.一種基于數字PCR平臺檢測基因缺失突變的試劑盒，其特征在于，包括以下物質中的至少一種：

（1）與未發生突變的野生型DNA模板互補的PNA探針；

（2）與突變位點下游DNA模板結合的標記TaqMan探針；

（3）用于擴增待檢測基因的正向和反向PCR擴增引物；

（4）用于擴增待測基因所在DNA模板上保守序列的正向和反向質控PCR引物；

（5）與待測基因所在DNA模板上保守序列結合的質控TaqMan探針。