[發(fā)明專利]一種單細(xì)跑海帶粉及海帶寡糖的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410040785.5
• 申請(qǐng)日: 2014-01-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN103834610A
• 公開(kāi)（公告）日: 2014-06-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳海歌;姚子昂;李倩;張玉娟
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N5/04
• 分類號(hào): C12N5/04;C12P19/14;C12R1/38
• 代理公司: 大連八方知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 21226
• 代理人: 任洪成

1.一種單細(xì)胞海帶粉及海帶寡糖的制備方法，其特征在于具體制備方法為：

（1）、菌株的篩選

以海藻酸鈉為唯一碳源，將海邊采集的腐爛海帶放入無(wú)菌生理鹽水充分涮洗，得到?jīng)_洗液，吸取1ml沖洗液進(jìn)行10倍、100倍和1000倍三個(gè)梯度稀釋，每個(gè)梯度在用固體篩選培養(yǎng)基制備而成的平板上進(jìn)行涂布，將涂布好的平板置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，72h后觀察平板，挑取周圍有凹陷或者暈圈的單菌落確定為實(shí)驗(yàn)菌株，經(jīng)16srRNA鑒定后屬于假交替單胞菌屬HAS；

（2）、粗酶液的制備

挑取該菌株的單菌落，接入液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，24h后以4%的接種量進(jìn)行傳代，連續(xù)傳4代待菌株?duì)顟B(tài)穩(wěn)定后，對(duì)發(fā)酵液經(jīng)行離心，4000r/min，4℃，30min，所得上清液即為粗酶液；

（3）、海帶的降解

用蒸餾水充分沖洗海帶表面泥沙，將洗好的海帶放入三角瓶中，加入一定量的滅菌海水，使海帶的含量為10-50%，再接入2-10%的粗酶液，放入20-40℃的搖床中，150r/min旋轉(zhuǎn)震蕩12-48h；

（4）、一次性獲得單細(xì)胞海帶和海帶寡糖

對(duì)降解產(chǎn)物進(jìn)行離心，2000-5000r/min下離心10-30min，將沉淀物在-50℃下進(jìn)行冷凍干燥10-20h，得到單細(xì)胞海帶粉，上清液進(jìn)行選裝蒸發(fā)濃縮，經(jīng)除鹽除蛋白處理后在-50℃冷凍干燥8-12h，制備海帶寡糖。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單細(xì)跑海帶粉及海帶寡糖的制備方法，其特征在于所述步驟（1）中的固體篩選培養(yǎng)基為（w/v）：海藻酸鈉2%，NaNO_3?0.1%，NaCl?1.5%，KH₂PO_4?0.05%，MgSO_4·7H₂O?0.05%，F(xiàn)eSO_4·7H₂O?0.001%，瓊脂1%，蒸餾水，pH?為7.2。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單細(xì)跑海帶粉及海帶寡糖的制備方法，其特征在于所述步驟（2）中液體發(fā)酵培養(yǎng)基為（w/v）：海藻酸鈉0.7%，蛋白胨0.3%，NaCl?2.5%，MgSO₄?·7H₂O?0.025%，KH₂PO4?0.5%，NaNO₃?0.025%，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.001%，pH為?7.2。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種單細(xì)跑海帶粉及海帶寡糖的制備方法，其特征在于所述步驟（3）（4）中海帶經(jīng)酶解后一次性獲得單細(xì)胞海帶粉和寡糖。