[發(fā)明專利]3′-脫氧腺苷在制備廣譜疫苗增效的免疫佐劑中的應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410040650.9
• 申請日: 2014-01-28
• 公開（公告）號: CN103751778A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 朱乃碩;楊艷;劉蕊;白豆;蕫越
• 申請（專利權(quán)）人: 復(fù)旦大學(xué)
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 上海正旦專利代理有限公司 31200
• 代理人: 陸飛;盛志范

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種3′-脫氧腺苷及其組合物在制備廣譜疫苗（或抗原）增效的免疫佐劑中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

疫苗是控制許多烈性傳染病的有效手段，目前使用的疫苗大多是相關(guān)病原體的減毒株，然而許多病原體減毒株的開發(fā)較困難，另外一些病原體如流感病毒等，減毒株的效果并不明顯且存在病毒產(chǎn)生回復(fù)突變的危險。新研制出的重組核酸疫苗、合成多肽疫苗、雖然純度高、特異性強，但分子小，免疫原性弱，難以誘導(dǎo)機體產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答，需用佐劑以使得它們能夠在機體內(nèi)產(chǎn)生足以抵抗感染的抗體或者細胞免疫反應(yīng)。

天然免疫系統(tǒng)對病原體的反應(yīng)速度較快，通常在感染后的幾分鐘到幾小時之內(nèi)就能夠識別病原體，而典型的獲得性免疫反應(yīng)需要在幾天甚至數(shù)周后才被激發(fā)出來。研究發(fā)現(xiàn)天然免疫反應(yīng)能夠介導(dǎo)獲得性免疫反應(yīng)的發(fā)生，因而可通過天然免疫過程增強疫苗抗原性。機體的天然免疫系統(tǒng)主要通過模式識別受體（PRRs）對外來的微生物侵染進行識別，將PRRs的配體作為疫苗佐劑是佐劑研究領(lǐng)域的一個重要趨勢。3′-脫氧腺苷是從真菌中分離得到的鳥嘌呤核苷酸類似物，能夠特異性激活TLR7，產(chǎn)生顯著的Th1類免疫反應(yīng)。本發(fā)明將其單獨、與MHC表位抗原以一定比例混合或者直接偶聯(lián)作為一種高效快速反應(yīng)型疫苗佐劑應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種3′-脫氧腺苷在制備用于廣譜疫苗增效的免疫佐劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明所述的化合物3′-脫氧腺苷，其結(jié)構(gòu)式為：

該化合物3′-脫氧腺苷在制備廣譜疫苗（或抗原）增效的免疫佐劑中的應(yīng)用，具體是3′-脫氧腺苷單獨，或其組合物即3′-脫氧腺苷與MHC表位脂肽制成的混合物或3′-脫氧腺苷與MHC表位脂肽共價鍵偶聯(lián)物，作為用于廣譜疫苗（或抗原）增效的免疫佐劑。

本發(fā)明中，所述MHC表位肽制備方法為：

將能與MHC-I分子結(jié)合的9~11氨基酸，通過連接肽，同能與MHC-II分子結(jié)合的10~18氨基酸相偶聯(lián)，得到線性肽或分支肽，即MHC表位肽。

本發(fā)明中，所述的3′-脫氧腺苷在制備用于廣譜疫苗增效的免疫佐劑中的應(yīng)用，其特征在于所述3′-脫氧腺苷為小分子化合物，來源為中藥提取物。

本發(fā)明中，所述組合物中，3′-脫氧腺苷與MHC表位肽的質(zhì)量比為：100:1到1:100。

本發(fā)明中，所述廣譜疫苗（或抗原）可以為蛋白質(zhì)疫苗（或蛋白質(zhì)）、多肽疫苗、核酸疫苗或滅活疫苗等。

本發(fā)明中，所述滅活疫苗是將病原體經(jīng)公知的方法滅活后作為疫苗的抗原物質(zhì)。?

本發(fā)明中，所述免疫佐劑可通過注射、噴射、口服、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機體。

本發(fā)明中，所述3′-脫氧腺苷與MHC表位肽制成的混合物，其制備方法如下：

將5~500微克、濃度為20毫克/毫升的3′-脫氧腺苷的DMSO溶液，連同5~500微克MHC表位肽，加入到生理鹽水中混合；調(diào)整生理鹽水的容量，使混合物的最終濃度為1~200微克/毫升。

本發(fā)明的免疫佐劑與相應(yīng)疫苗（或抗原）一起使用，可增強機體對以下致病病原體的免疫應(yīng)答能力：病毒、原核細胞、真核細胞。其中，病毒性病原體包括但不局限于狂犬病毒、乙肝病毒、呼吸道病毒、瘡疹病毒。

附圖說明

圖1?免疫后增強小鼠血清中抗體產(chǎn)生變化情況（增強抗狂犬病毒抗體范例）。

圖2免疫后小鼠血清中抗病毒細胞因子IFN-γ增加變化情況。

圖3免疫后小鼠血清中T細胞活化因子IL-2變化情況。

圖4?流式細胞法檢測免疫后小鼠CD3⁺?CD8^+?T細胞分化情況。

圖5體外CTL對攜帶病毒抗原靶細胞殺傷試驗。

具體實施方式

一、3′-脫氧腺苷對狂犬病毒疫苗效果的影響評價。

1、ELISA法（酶聯(lián)免疫吸附實驗）檢測小鼠免疫后體內(nèi)抗狂犬病毒抗體以及相關(guān)細胞因子的濃度