[發明專利]人白細胞介素II突變體及其應用

有效

• 申請號: 201410040477.2
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN104231068A
• 公開（公告）日: 2014-12-24
• 發明（設計）人: 劉根桃;岳喜連
• 申請（專利權）人: 蘇州發士達生物科技有限公司
• 主分類號: C07K14/55
• 分類號: C07K14/55;C12N15/26;C12N15/63;A61K38/20;A61K39/39;A61P35/00;A61P31/12
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

技術領域

本發明涉及一種人白介素II突變體，尤其涉及一種低毒、高效、副作用小的人白細胞介素II突變體及其在制備生物醫藥中用途。?

背景技術

白細胞介素II（interleukin-2，IL-2，白介素II）是T淋巴細胞分泌的一種淋巴因子（人白介素II由133個氨基酸組成的蛋白質多肽鏈，分子量為15KD，其氨基酸序列如本發明序列表SEQ?ID?No.1和SEQ?ID?No.2所示），是維持免疫系統中正常功能的最重要分子之一。白介素II能促進T細胞成熟、維持T細胞活性，還能促進細胞毒性T淋巴細胞的活性，并使其轉化為腫瘤浸潤淋巴細胞（TIL），促進自然殺傷（NK）細胞的活性，并誘導殺傷腫瘤的淋巴因子細胞和殺傷細胞（CTL）的增長。白介素II具有增強人體免疫功能，激活自然殺傷細胞，擴增T淋巴細胞的作用，能誘導和激活淋巴因子激活的殺細胞（LAK）及腫瘤浸潤淋巴細胞，這些細胞都有殺傷外源微生物感染細胞以及癌變細胞的作用。WO99/60128A1對白介素II的作用進行了詳細介紹。?

由于白介素II具有顯著的增強免疫作用，故它有很好的抗病毒、抗癌作用和廣泛的臨床應用潛力。通過促進T細胞和NK細胞成熟和增殖，白介素II具有誘導抗腫瘤免疫的功效，研究發現白介素II對腎細胞癌、黑素瘤、非何杰金氏淋巴瘤、結腸直腸癌有較明顯療效，對肝癌、軟巢癌、頭頸部鱗癌、膀胱癌、肺癌等有不同程度的療效，并早已被FDA批準用于黑色素瘤和腎細胞癌的臨床治療。在我國白介素II也已廣泛應用于臨床癌癥治療和病毒感染。?

目前已有大量關于IL-II藥物制劑的報道，如US5358708、US4604377、US5417970等公開的水性制劑或凍干粉劑。?

但是，同時白介素II在臨床上有許多毒副作用。在低劑量下，白細胞介素II促進淋巴細胞殺死腫瘤功能微小，但是它卻明顯地促進調節性T細胞功能，增加?外周血調節性T細胞（T抑制細胞）（CD4+CD25+細胞）的數量（JEM201:723-735），進一步抑制浸潤淋巴細胞的功能和增殖，并抑制抗腫瘤免疫反應（JI26:85-93）；在高劑量下，白細胞介素II能引起病人疼痛、高燒、惡心、嘔吐、肺水腫、血管滲漏、甚至死亡（JCO21:3127-3132）。由于具有殺死腫瘤細胞和促進抑制細胞的雙重功能，目前，白介素II的臨床應用因其嚴重毒性而受到很大限制，據估計，僅有20%左右的相關疾病患者能夠采用白介素II進行治療。?

發明內容

為了解決人白介素II副作用明顯的缺陷，本發明提供了一種低毒高效副作用小的人白介素II突變體，同時保持了激活自然殺傷細胞及腫瘤浸潤淋巴細胞功能，從而擴大其在臨床上的應用。?

本發明第一個方面是提供一種人白細胞介素II突變體，包括一種序列，所述序列為人白細胞介素II氨基酸序列中，在與人白細胞介素II的α和/或β受體結合點發生突變的序列；其中，與α受體結合點的突變降低所述人白細胞介素II與α受體的親和力；與β受體結合點的突變增強與β受體的親和力。?

在本發明的一種優選實施例中，所述結合點選自人白細胞介素II氨基酸序列的37、38、41-45、61、62、65、68、72、80、81、85、86、92位點中的任意一個或多個。?

在本發明的一種優選實施例中，所述發生突變的結合點至少為3個，更優選為至少為5個，更優選為至少為6個。?

在本發明的一種優選實施例中，所述發生突變的結合點至少包括人白細胞介素II氨基酸序列的65、80、81、85、86、92位點。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變包括氨基酸的缺失或者替代，并優選為人白細胞介素II序列中的相應的氨基酸被其它不同氨基酸替代。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變至少包括：人白細胞介素II氨基酸序列的65位點的氨基酸Pro被氨基酸Arg替代。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變至少包括：人白細胞介素II氨基酸序列的80位點的氨基酸Leu被氨基酸Phe替代。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變至少包括：人白細胞介素II氨基酸?序列的81位點的氨基酸Arg被氨基酸Asp替代。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變至少包括：人白細胞介素II氨基酸序列的85位點的氨基酸Leu被氨基酸Val替代。?

在本發明的一種優選實施例中，所述突變至少包括：人白細胞介素II氨基酸序列的86位點的氨基酸Ile被氨基酸Val替代。?