[發(fā)明專利]一種鑒別印楝油的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410039926.1
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號(hào): CN103760185A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙天增;張海艷;董建軍;景炳年;陳玲;常霞;范毅;張義東;魏悅;于立芹;劉雨晴;李自紅
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省科高植物天然產(chǎn)物開發(fā)工程技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N24/08
• 分類號(hào): G01N24/08
• 代理公司: 鄭州聯(lián)科專利事務(wù)所(普通合伙) 41104
• 代理人: 劉建芳;楊海霞

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于天然藥用植物的鑒別領(lǐng)域，具體地，涉及一種鑒別印楝油的方法。

背景技術(shù)

印楝油是從印楝(Azadirachta?indica?A.Juss)果子中榨取的植物油，具有拒食驅(qū)避、降低昆蟲腸道活力、抑制昆蟲生長發(fā)育、抑制和阻止昆蟲蛻皮、抑制成蟲交配產(chǎn)卵等作用，是制造各生物農(nóng)藥的理想原料。具有殺蟲譜廣、害蟲不易產(chǎn)生抗藥性、環(huán)境中無殘留等特點(diǎn)，能與多種農(nóng)藥及殺菌劑混配。在印度和孟加拉等過度，印楝油最常應(yīng)用于肥皂、護(hù)發(fā)產(chǎn)品、身體乳液及護(hù)手霜等護(hù)理保養(yǎng)產(chǎn)品。印楝油使用的范圍從皮膚疾病、感染、發(fā)炎癥、發(fā)燒，甚至應(yīng)用于風(fēng)濕癥的舒緩等。

印楝油成分復(fù)雜，各組分分析較難。通常，人們對印楝油進(jìn)行皂化得到了印楝油的總脂肪酸甲酯，?然后用?GC或GC-MS定性測定其中所含高級(jí)脂肪酸的相對含量[①羅喜榮，等.?中國油酯2002,?27(4):?78.?②李俊峰，等.?云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)2005,?14(3):?278.]。其中主流方法GC色譜法由于受非色譜條件（如色譜柱內(nèi)徑、長度、固定相牌號(hào)、載體粒度、流動(dòng)相流速、混合流動(dòng)相各組分比例、柱溫、進(jìn)樣量、檢測器靈敏度等）影響較大和需用標(biāo)準(zhǔn)品等等原因，重復(fù)性和可行性均存在許多局限性；?GC-MS分析方法存在MS離子化程度和基質(zhì)干擾等問題。

IGD核磁共振碳譜偶聯(lián)（IGD?¹³C?NMR?coupling）指紋圖譜技術(shù)，也叫反門控去偶核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜技術(shù)，該技術(shù)是在已研究多年的核磁共振氫譜（¹H?NMR）指紋圖譜技術(shù)[趙天增，等.1HNMR指紋法鑒定植物中藥，中草藥2000，31(11)：868-870]的基礎(chǔ)上聯(lián)合其他技術(shù)（例如目前應(yīng)用最廣泛的高效液相（HPLC）指紋圖譜技術(shù)[謝培山等，中藥色譜指紋圖譜，人民衛(wèi)生出版社，2005]）提出的一種新的非單一手段綜合指紋圖譜技術(shù)。

印楝油IGD核磁共振碳譜偶聯(lián)指紋圖譜的研究與應(yīng)用，對印楝油的鑒別和評價(jià)提供了一條新的思路，也為加強(qiáng)印楝油內(nèi)在成分研究的系統(tǒng)化與標(biāo)準(zhǔn)化，實(shí)現(xiàn)與國際接軌提供了科學(xué)的保證。隨著該技術(shù)在其他中藥材及其提取物、植物源農(nóng)藥中的推廣應(yīng)用，該技術(shù)的重大科學(xué)價(jià)值必將日趨突出。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)的問題，本發(fā)明目的在于提供一種鑒別印楝油的方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：

一種鑒別印楝油的方法，其包括以下步驟：

1）取印楝油或印楝油衍生品直接作為含有脂肪酸活性成分組的特征提取物；

2）對所述特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，根據(jù)指紋圖譜得到特征提取物中若干個(gè)活性成分特征峰峰強(qiáng)度；并用相同方式（IGD核磁共振碳譜指紋圖譜）測定出所述各活性成分相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；

3）通過定量分析手段得到所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對含量；

4）利用各活性成分特征峰峰強(qiáng)度及相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度的比值和所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對含量，計(jì)算出印楝油或印楝油衍生品中各活性成分的含量及該類活性成分的總含量，即活性成分組的含量。

其中，步驟2）中，對特征提取物進(jìn)行IGD核磁共振碳譜指紋圖譜檢測，溶解特征提取物的溶劑為氘代氯仿（CDCl₃）；特征提取物和所述溶劑的質(zhì)量體積比為190:1－210:1（mg:ml），優(yōu)選200:1。

步驟2）中，特征提取物中的活性成分特征峰為羰基吸收峰（即C-1吸收峰），其化學(xué)位移為δ_C?170.0－185.0。

步驟2）中，所述峰強(qiáng)度可以采用峰高法、面積積分法或重量法計(jì)算。

步驟3）中，所述定量分析手段為氣相色譜（GC）法；所述標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對含量是指：用定量分析手段測定的標(biāo)準(zhǔn)參照品的質(zhì)量百分含量。

進(jìn)一步地，所述特征提取物中的活性成分的標(biāo)準(zhǔn)參照品為油酸甲酯。

其中，步驟4）中，計(jì)算各活性成分含量的偶聯(lián)公式為：

；其中：

W₁為步驟3）用定量分析手段測定的印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)參照品的絕對含量；

M₁為所述印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)參照品的分子量/定量峰對應(yīng)的碳個(gè)數(shù)；

h₁為由IGD核磁共振碳譜指紋圖譜測定的印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分對應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)參照品的特征峰峰強(qiáng)度；

W_n為印楝油或印楝油衍生品中某一活性成分的質(zhì)量百分含量；