[發明專利]VEGF抗體及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201410039879.0
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103772501A
• 公開（公告）日: 2014-05-07
• 發明（設計）人: 何勇智;叢聰;代云見;張勇俠;李坤;李春陽;王保成;秦嬌榮;趙兆;王明蓉;何明躍
• 申請（專利權）人: 成都生物制品研究所有限責任公司
• 主分類號: C07K16/22
• 分類號: C07K16/22;C07K16/46;C12N15/13;C12N15/62;C12N15/70;C12N1/21;C12P21/02;A61K39/395;A61P35/00;A61P27/02
• 代理公司: 成都高遠知識產權代理事務所(普通合伙) 51222
• 代理人: 李高峽;張娟

1.VEGF單域抗體，其特征在于：它的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:1～SEQ?ID?NO:6任意一項所示。

2.VEGF融合抗體，其特征在于：它是由權利要求1所述的單域抗體通過連接肽連接而成的融合抗體，或者在權利要求1所述單域抗體的C末端連接Fc片段形成的融合抗體；

優選地，所述融合抗體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:10所示。

3.根據權利要求2所述的融合抗體，其特征在于：所述連接肽的氨基酸序列為：GGGGSGGGGSGGGGS；

優選地，所述融合抗體如SEQ?ID?NO:7所示。

4.VEGF三聚體抗體，其特征在于：其單體是由權利要求1所述單域抗體與異亮氨酸拉鏈連接而成。

5.根據權利要求4所述的三聚體抗體，其特征在于：所述單體中，異亮氨酸拉鏈的氨基酸序列為QRMKQIEDKIEEILSKIYHIENEIARIKKLVGER；

優選地，所述單體的氨基酸序列如SEQ?ID?NO:8或9所示。

6.編碼權利要求1～5任意一項所述抗體的核苷酸序列；

優選地，其序列如SEQ?ID?NO:11～SEQ?ID?NO:20所示。

7.一種含有權利要求6所述核苷酸序列的表達載體；

優選地，所述表達載體為重組pET22b質粒。

8.一種含有權利要求7所述表達載體的重組菌；

優選地，所述的重組菌為BL21（DE3）大腸桿菌。

9.權利要求1～5任意一項所述抗體的制備方法，其特征在于：包含如下步驟：

（1）取權利要求8所述的重組菌，接種到含有0.5～1.5%（w/v）葡萄糖、50～150mg/L氨芐青霉素的LB培養基或者YT培養基中，34～40℃培養10～15h，得菌液；

（2）按照0.5～1.5%（v/v）的接種量，將步驟（1）所得菌液接種至含有50～150mg/L氨芐青霉素的LB培養基或者YT培養基中，34～40℃培養至OD₆₀₀=0.6～0.8；

（3）加入IPTG至終濃度為0.2～0.4mmol/L，在20～30℃的條件下，誘導培養3～7小時；

（4）收集培養物，分離純化，即得VEGF抗體。

優選地，步驟（1）中，所述培養基中葡萄糖的濃度為1%（w/v），氨芐青霉素的濃度為100mg/L；所述培養的溫度是37℃；所述培養時間為12h；

步驟（2）中，所述培養基中氨芐青霉素的濃度為100mg/L，所述培養的溫度是37℃；

步驟（3）中，IPTG的終濃度為0.3mmol/L；誘導培養的溫度為25℃，時間為5小時。

10.權利要求1～5任意一項所述抗體在制備抗腫瘤藥物或治療老年黃斑變性疾病藥物中的用途。