[發(fā)明專利]一種甲型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410039468.1
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103898066A
• 公開（公告）日: 2014-07-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 廖國陽;李衛(wèi)東;楊景暉;周芳燁;馬磊;周健;蔡瑋;寸怡娜;高菁霞;張新文;戴宗祥;姜述德
• 申請（專利權(quán)）人: 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/145;A61P31/16;C12R1/93
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種甲型流感病毒Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株，并涉及以此適應(yīng)株作為母本毒株與其他流行毒株進(jìn)行重配，從而獲得含有流行株表面抗原的Vero細(xì)胞冷適應(yīng)株，以作為制備Vero細(xì)胞流感減毒活疫苗或流感減毒活疫苗以及流感滅活疫苗的毒種，屬于生物制品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

流感病毒屬于正粘病毒科，其病毒顆粒呈球形或絲狀，核衣殼呈螺旋對稱，病毒基因組為單股負(fù)鏈分節(jié)段的RNA，有包膜。根據(jù)病毒核蛋白（NP）和基質(zhì)蛋白（MP）的抗原性，可將流感病毒分為甲（A）、乙（B）、丙（C）三型，其中甲型和乙型流感病毒的基因含有8個(gè)RNA片段，丙型流感病毒的基因含有7個(gè)片段；甲型流感病毒又可根據(jù)流感病毒血凝素（HA）和神經(jīng)氨酸酶（NA）抗原性不同，再分為若干亞型。甲型流感病毒常以流行形式出現(xiàn)，乙型流感呈局部爆發(fā)，丙型流感主要是以散發(fā)形式出現(xiàn)。其中甲型和乙型流感病毒與人類有密切聯(lián)系，甲型流感病毒除感染人外，還可感染飛禽、豬、馬等動(dòng)物。而人在生活中與這些動(dòng)物接觸頻繁，為流感病毒產(chǎn)生變異提供有利條件，變異后的病毒會(huì)導(dǎo)致流感流行，變異程度大則導(dǎo)致大流行。

流感病毒表面抗原的變異是流感流行的主要原因，其表面抗原的變異存在兩種機(jī)制：一種被稱為抗原漂移，另一種變異被稱為抗原大變異。抗原漂移在甲型流感病毒和乙型流感病毒上都會(huì)發(fā)生，主要是通過在HA和NA基因上的點(diǎn)突變和多種氨基酸選擇性突變，來逃過機(jī)體的免疫作用和以前感染病毒后獲得的抗體對病毒的抑制作用，抗原漂移會(huì)產(chǎn)生新的流行株，同時(shí)也是流感病毒能感染人類，并繼續(xù)進(jìn)化的原因。抗原大變異僅發(fā)生在甲型流感病毒上，當(dāng)宿主細(xì)胞同時(shí)被兩種不同亞型的甲型流感病毒感染時(shí)，新生的子代病毒可獲得來自兩個(gè)親代病毒的基因片斷，成為基因重配病毒。基因重配產(chǎn)生甲型流感病毒抗原性突變株，如果該突變株在未接種免疫疫苗的易感人群中傳播，就會(huì)引起流感大流行。

在人群中廣泛流行的甲型流感病毒有H₁N₁，H₂N₂和H₃N₂三個(gè)亞型。甲型流感病毒的16種HA和9種NA組成的亞型也廣泛存在于一些野生動(dòng)物，如水鳥中。如果病毒沒有經(jīng)過遺傳重配，禽流感亞型一般不對人產(chǎn)生有效的感染，但這種迅速擴(kuò)散的病毒由于經(jīng)常性的基因再分化，可能感染人類。例如，自從1997年香港爆發(fā)禽流感以來，H₅N₁亞型經(jīng)過遺傳修飾，除了導(dǎo)致在禽類中大規(guī)模爆發(fā)，還產(chǎn)生了多例人感染的事件。2003年發(fā)現(xiàn)了該病毒株的變異，出現(xiàn)了可以感染人的新變異株。據(jù)法新社的數(shù)據(jù)，H₅N₁禽流感病毒2003年至2011年間在全球共計(jì)致死超過300人，導(dǎo)致大約4億只家禽遭撲殺，造成大約200億美元損失。

接種流感疫苗是預(yù)防和降低流感嚴(yán)重程度的最有效手段，包括滅活疫苗和減毒活疫苗。1941年雞胚制備的流感滅活疫苗在美國首次獲得批準(zhǔn)，在全世界得到廣泛應(yīng)用。目前使用的主要是用雞胚制備的滅活流感三聯(lián)裂解疫苗，包括甲型流感病毒H₁N₁株、H₃N₂株和乙型流感病毒毒株。疫苗株的組分是由WHO根據(jù)每年全球流感病毒的變化規(guī)律推薦的，用于下一年度疫苗生產(chǎn)用流感病毒流行株的表面抗原來確定的。甲型流感病毒聯(lián)合體實(shí)驗(yàn)室利用反向遺傳學(xué)技術(shù)，采用雞胚高產(chǎn)株的六個(gè)內(nèi)部基因與野生流行株的HA和NA基因重配（6+2重配）得到的，含有流感病毒流行株的HA和NA表面糖蛋白的新疫苗株，具有在雞胚上高產(chǎn)的特性。