[發明專利]甘草酸二銨佐劑及含甘草酸二銨佐劑的疫苗

有效

• 申請號: 201410039465.8
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103751777A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 胡凝珠;王霄;王海漩;胡云章;李彥涵;李建芳
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: A61K39/39
• 分類號: A61K39/39;A61P37/04
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種新型疫苗佐劑，具體涉及一種甘草酸二銨佐劑以及含該佐劑的疫苗，屬于免疫學技術領域。

背景技術

鋁佐劑作為疫苗的免疫佐劑，現在已經廣泛應用于甲肝疫苗、乙肝疫苗、百白破三聯疫苗等。鋁佐劑的作用機理主要是在組織中形成抗原貯藏庫，產生顆粒性抗原，促進抗原遞呈給免疫細胞，使抗原滯留，緩慢釋放，從而吸引活性淋巴細胞，激活補體系統。經過幾十年的使用，證實鋁佐劑作為免疫佐劑是有效的。但由于目前鋁佐劑仍存在諸如不能誘導細胞免疫、注射部位偶有局部嚴重反應、誘導IgE介導的變態反應等缺陷，使其應用范圍受到限制。

研究人員一直致力于開發一種新型佐劑以替代氫氧化鋁佐劑。甘草酸二銨是中藥甘草有效成分的第三代提取物，具有較強的抗炎、保護肝細胞膜及改善肝功能的作用，具有誘生干擾素和增強非特異性免疫功能的作用，具有成為新型疫苗佐劑的研發價值。

發明內容

為解決現有疫苗佐劑存在的毒副作用、價格昂貴等問題，本發明提供一種安全、有效、穩定、經濟的甘草酸二銨佐劑。

本發明還提供一種含有甘草酸二銨佐劑的疫苗。

本發明所述甘草酸二銨在制備疫苗佐劑中的應用。

本發明提供的疫苗佐劑——甘草酸二銨，分子式為C₄₂H₆₂O₁₆·2H₃N，分子量為856.997，結構式如圖1所示，在人體中的推薦劑量為小于或者等于200mg，優選0.1～1mg。

甘草酸二銨佐劑誘導的免疫反應為體液免疫反應。

甘草酸二銨佐劑能顯著增強抗原特異性的體液免疫反應。

本發明提供這樣一種疫苗，其特征在于每單份疫苗劑中含有0.1mg～1mg的甘草酸二銨佐劑。

所述每單份疫苗劑為臨床或者動物實驗中使用的常規單次注射參考量。

本發明提供的含有甘草酸二銨佐劑的疫苗經過下列方法制備：

按每單份疫苗劑加入0.1～1mg甘草酸二銨的量，在疫苗中加入甘草酸二銨后，再加生理鹽水至100－200ul，按常規混合，得含有甘草酸二銨佐劑的疫苗。

所述疫苗為常規甲肝抗原、乙肝抗原、狂犬病毒抗原中的一種。

本發明的有益效果是：（1）甘草酸二銨佐劑無毒、副作用，在免疫劑量范圍內使用是安全可靠的；（2）甘草酸二銨佐劑能夠有效的誘導抗原特異性的體液免疫應答。（3）甘草酸二銨佐劑原料易得，制備工藝簡單，成本低，性能穩定。

附圖說明

圖1為甘草酸二銨分子結構式。

具體實施方式

下面結合實施例，進一步闡述本發明。這個實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍，下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規條件或按照制造廠商所建議的條件。文中所述的較佳條件實施方法僅作示范之用。

實施例1

本實施例提供的甘草酸二銨佐劑用量為0.1mg。

本實施例提供的含有甘草酸二銨佐劑的疫苗是：在每單份HAV抗原（即動物實驗中使用的單次注射劑量）中，加入0.1mg甘草酸二銨，再加生理鹽水至200ul，按常規混合后，得含有甘草酸二銨佐劑的甲肝疫苗，其中甘草酸二銨為市購產品，購自江蘇正大天晴藥業股份有限公司，國藥準字H10940190；HAV抗原為市購的抗原滴度為512EU/ml的18EU?HAV抗原液，購自中國醫學科學院北京協和醫學院醫學生物學研究所。

本實施例1所得含有甘草酸二銨佐劑的甲肝疫苗的免疫試驗和效果如下：

A、免疫

將6～8周齡、18～22g的清潔級ICR小鼠隨機分為甘草酸二銨佐劑組、氫氧化鋁佐劑組、無佐劑組和空白組，共四組，每組8只，所用的氫氧化鋁為常用的氫氧化鋁膠體佐劑，其制法參照《中國藥典（三部）》，（國家藥典委員會.北京:人民衛生出版社.2005:118-119），在人體中的劑量為1.8～2.7mg。

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對甘草酸二銨佐劑組：將上述實施例1的含有甘草酸二銨佐劑的甲肝疫苗腹部皮下多點注射到小鼠體內，注射劑量為每只小鼠200μL，其中疫苗中含有甘草酸二銨佐劑0.1mg，甲肝抗原18EU；

對氫氧化鋁佐劑組：將氫氧化鋁0.3mg與甲肝抗原18?EU?混合后加生理鹽水至200?ul，再經腹部皮下多點注射到小鼠體內，注射劑量為每只小鼠200μL；

對無佐劑組：將甲肝抗原18?EU與生理鹽水混合至200?ul，再經腹部皮下多點注射到小鼠體內，注射劑量為每只小鼠200μL；