[發明專利]一種從胎盤中灌洗造血干細胞的方法

有效

• 申請號: 201410039328.4
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN103756965A
• 公開（公告）日: 2014-04-30
• 發明（設計）人: 戴曉宇;李棟
• 申請（專利權）人: 山東省齊魯干細胞工程有限公司
• 主分類號: C12N5/0789
• 分類號: C12N5/0789
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

技術領域

本發明涉及一種從胎盤中灌洗造血干細胞的方法。

背景技術

目前在國際血液系統疾病的治療中主要采取的造血干細胞移植的方法，根據細胞的來源，可分為三類：骨髓造血干細胞移植(BMT)、動員周圍血干細胞移植(MPST)和臍帶血干細胞移植(UCBT)。前兩者干細胞來源豐富，一般有核細胞數可達5-10×10⁸/Kg，CD34+細胞(一種造血干/祖細胞的表面標記)可達1-5×10⁶/Kg，可是由于供者和受體之間需HLA嚴格相符，才能保證移植的成功，否則供者造血干細胞不易在病人體內植活，即使成活也會發生較嚴重的移植物抗宿主病(GVHD)。在一個家庭的子女中，僅有1/4?HLA相符的機率，而在非血緣關系的無關供者中，這種機率只有百分之一，極大的限制了BMT或MPST在臨床上的廣泛應用。

近十余年來臍帶血造血干細胞移植在臨床上成功的應用促進了臍帶血造血干細胞研究的發展。臍帶血來自于胎盤，通常在婦女分娩后廢棄，現在發現臍帶血中含豐富的造血干細胞，其CD34+細胞的濃度和骨髓類似，約占總細胞數的0.1-0.5％，而更早期的造血干細胞CD34-還較骨髓濃度更高。作為一種造血細胞的來源，現在利用臍帶血移植手術正在逐漸增加。與BMT相比，UCBT的優勢在于減少了嚴重的移植物抗宿主反應，有效的擴大了對于那些缺少合適的人類白細胞抗原配型家庭或者無關供體移植的可能性。臍帶血移植主要的限制在于臍血中的造血干細胞數量有限。這種限制促使臨床中使用2倍劑量單位臍血移植較大的成年受助人，另一種方法是進行體外造血干細胞擴增培養，但體外擴增需要花費時間，費用也高，更重要的是擴增的同時，造血干細胞也發生分化，臨床應用的結果表明臍血細胞擴增前后對移植無多大差異。

人類足月胎盤存在大量的造血干細胞，比臍帶血有更多的造血干細胞，而且這些胎盤造血干細胞在冷凍儲存前后都可以分離出來。胎盤造血干細胞菌落形成單位（CFU）的活性是確定的，在免疫缺陷鼠中的移植實驗已經證明胎盤細胞在移植中的潛力。這些結果有力地表明，人類足月胎盤有可能成為一種新型的用于移植的造血干細胞的來源。并且胎盤中有大量的造血干細胞，胎盤血干細胞是較為早期的干細胞，能在體內分化成各種細胞，胎盤血內含有豐富的各種階段早期造血干細胞，其含量大約是臍帶血的十幾倍，一個胎盤中的造血干細胞可完全滿足于兩個成年人的需求，若能和臍帶血細胞一起應用于病人，無疑大大增加了造血干細胞的含量，使這造血干細胞可完全應用于所有的適用人群。

專利CN01131190.8公開了一種通過剪碎消化的方法獲得造血干細胞的方法，方法復雜，獲得的造血干細胞數量少、純度低，且細胞容易染菌。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供了一種從健康產婦的足月胎盤中灌洗造血干細胞的方法。

所述的方法包括胎盤的收集、胎盤的初檢、胎盤的預消毒、胎盤及母血檢測、胎盤造血干細胞的灌洗、造血干細胞的濃縮純化六個步驟，各步驟具體為：

（1）胎盤的收集：在手術室無菌環境下收集胎盤及母血，存放于無菌的胎盤儲運盒中，貼好標簽、條碼，胎盤儲運盒的溫度保持在4-10?℃，24小時內送達實驗室；

（2）胎盤的初檢：檢查胎盤儲運盒盒內溫度、標簽、送達日期、儲運盒是否有滲漏、是否有母血血樣；

（3）胎盤的預消毒：將胎盤的胎兒面展開放置于胎盤沖洗盒的底部，用生理鹽水沖洗胎盤表面，打開胎盤沖洗盒底面的排水孔，去掉沖洗的生理鹽水，檢查胎盤表面鈣化情況；

（4）胎盤及母血檢測：對所取的胎盤和母血樣本進行檢測，檢測的項目包括肝炎病毒檢測、艾滋病毒檢測、性病檢測、組織配型（HLA）檢測、造血干/祖細胞定性檢測（CFU-GM）；

（5）胎盤造血干細胞的灌洗：將胎盤在無菌條件下用無菌生理鹽水清洗掉胎盤上的血凝塊及積血，采用消毒劑消毒后，將灌注液針頭插入胎盤臍動脈中，胎盤灌注回收瓶針頭插入臍靜脈中，止血鉗夾緊，緩慢開啟恒流泵，灌注液經膠管、開關、蠕動泵、針頭、胎盤動脈、胎盤、胎盤靜脈、胎盤灌注回收瓶針頭，最后在灌洗液回收瓶中接收灌洗液；