[發明專利]細胞表面標志分子用于檢測肝癌循環腫瘤細胞的用途

在審

• 申請號: 201410039127.4
• 申請日: 2014-01-27
• 公開（公告）號: CN104807996A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 趙曉航;穆洪;張澤;許楊;孫玉琳;喬媛媛
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院腫瘤醫院;中國人民解放軍海軍總醫院
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/577
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所 11038
• 代理人: 劉向昕

技術領域

本發明涉及細胞表面標志分子用于檢測肝細胞肝癌循環腫瘤細胞的用途，具體涉及磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）、去唾液酸糖蛋白受體（asialoglycoprotein?receptor，ASGPR）1/2和/或細胞角蛋白組合（cytokeratins，CK）8/18/19在檢測肝細胞肝癌循環腫瘤細胞中的用途。

背景技術

肝癌發病率和死亡率分別占全球惡性腫瘤第五和第二位，年死亡人數與新發病例數幾乎相同，約60萬。肝癌也是我國常見惡性腫瘤，發病率和死亡率分別占我國惡性腫瘤第三和第二位，其中肝細胞肝癌（hepatocellular?carcinoma,HCC）是肝癌的主要類型，約70%死于腫瘤的轉移復發。目前肝細胞肝癌以外科治療為主，如腫瘤切除術和肝移植術，主要問題為術后轉移復發。

循環腫瘤細胞（circulating?tumor?cells,CTCs）是從上皮來源的實體腫瘤脫落，進入外周血的腫瘤細胞。循環腫瘤細胞會隨血流遷移到達合適的微環境，種植于遠處器官，形成轉移灶。

檢測循環腫瘤細胞有助于發現早期微轉移灶，可以用來動態監測腫瘤病情的發展，為評估患者預后及監測臨床治療效果提供參考信息。既往研究表明存在于外周血中的循環腫瘤細胞與較高的復發危險程度相關，現主要用于轉移性乳腺癌、前列腺癌、結腸癌的臨床檢測，以輔助預后評估。

目前從外周血中檢測循環腫瘤細胞的技術依照對象分為檢測腫瘤細胞核酸和檢測腫瘤細胞自身。腫瘤細胞核酸檢測技術依賴于針對腫瘤細胞特異的DNA序列設計的RT-PCR和qPCR方法，假陽性率高，穩定性差；基于腫瘤細胞的檢測技術依賴于腫瘤細胞表面特異表達的蛋白標志，富集腫瘤細胞后用細胞病理學的金標準直觀地觀察腫瘤細胞的形態，而成為循環腫瘤細胞鑒定的主流方法之一。CellSearch^TM系統自2004年以來被美國食品藥品監督管理局（Food?and?Drug?Administration,FDA）先后批準用于轉移性乳腺癌、前列腺癌、結腸癌患者外周血循環腫瘤細胞檢測，該方法也于2012年8月被我國食品藥品監督管理局（China?Food?and?Drug?Administration,CFDA）批準用于轉移性乳腺癌患者外周血循環腫瘤細胞的檢測。CellSearch^TM系統的基本原理是基于捕獲和富集外周血中帶有上皮細胞表面標記上皮細胞粘附分子（epithelial?cell?adhesion?molecule,EpCAM）的稀有的腫瘤細胞，將細胞表面帶有EpCAM標記（EpCAM⁺）和細胞角蛋白（cytokeratins，CK）8、18及/或19標記（CK⁺），排除白細胞表面標記CD45（CD45^-）的有核細胞（細胞核染料4,6-聯瞇-2-苯基吲哚，4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI⁺）鑒定為乳腺癌、前列腺癌和結腸癌的循環腫瘤細胞。

然而，該方法不適用于肝細胞肝癌外周血循環腫瘤細胞的檢測，因為研究表明：①僅僅有30%左右的肝癌細胞表面表達EpCAM；②不僅如此，表達EpCAM的肝細胞肝癌屬于外周血中為數很少的肝癌腫瘤干細胞樣細胞，其生物學特性和普通外周血循環腫瘤細胞有很大區別；③腫瘤具有異質性（heterogenicity），即由一個克隆來源的腫瘤細胞在生長過程中形成在侵襲能力、生長速度、對刺激的反應、對抗癌藥物的敏感性等方面有所不同的亞克隆的過程。大約30%的上皮來源腫瘤細胞表面不表達EpCAM，具有異質性；④無論美國的FDA和中國的CFDA都沒有官方授權批準用于檢測肝細胞肝癌外周血循環腫瘤細胞的方法。因此，研究肝細胞肝癌代表性的細胞表面標志分子用以鑒定循環中肝細胞肝癌來源的有核細胞，即肝細胞肝癌的循環腫瘤細胞非常必要。

發明內容

本發明的發明人經過大量實驗研究和反復摸索，找到了適合檢測肝細胞肝癌的循環腫瘤細胞的細胞表面標志分子以及相應的檢測方法，由此完成了本發明。

本發明第一方面涉及檢測細胞表面標志分子的試劑用于制備檢測肝細胞肝癌的循環腫瘤細胞的產品（例如試劑盒）的用途，所述細胞表面標志分子選自細胞表面表達CK8、CK18、CK19、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（glypican-3，GPC3）、去唾液酸糖蛋白受體（asialoglycoprotein?receptor，ASGPR）1、ASGPR2中的至少一種。