[發(fā)明專利]一種豬支原體肺炎減毒活疫苗及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410038836.0
• 申請(qǐng)日: 2014-01-26
• 公開（公告）號(hào): CN103740625A
• 公開（公告）日: 2014-04-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵國(guó)青;熊祺琰;劉茂軍;馮志新;韋艷娜;王海燕;白方方;甘源;王麗;張道華;劉冬霞;華利忠;武昱孜;白昀;王占偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A61K39/02;A61P11/00;A61P31/04;A61P37/04;C12R1/35
• 代理公司: 南京天華專利代理有限責(zé)任公司 32218
• 代理人: 徐冬濤;尹慧晶

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種豬支原體肺炎減毒疫苗株，含有該減毒株的活疫苗，及其在保護(hù)豬肺炎支原體感染相關(guān)疾病中的應(yīng)用。?

背景技術(shù)

豬支原體肺炎，俗稱豬氣喘病，是由豬肺炎支原體(Mycoplasma?hyopneumoniae，Mhp)引起的一種豬的慢性呼吸道傳染性疾病，主要癥狀為咳嗽和氣喘。該病主要引起豬的飼料轉(zhuǎn)化率下降和生長(zhǎng)受阻，發(fā)病率高、死亡率低。豬支原體肺炎在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給現(xiàn)代養(yǎng)豬業(yè)造成重大經(jīng)濟(jì)損失。?

豬肺炎支原體常常與其他病原形成混合感染。例如與多殺性巴氏桿菌（Pasteurella?Multocida）、豬鏈球菌（Streptococcus?Suis，SS）、副豬嗜血桿菌（Haemophilus?Parasuis?of?Swine，HPS）或豬胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus?Pleuropneumonia?of?Porcine，APP)等混合感染，引發(fā)豬地方流行性肺炎。當(dāng)豬肺炎支原體與豬繁殖呼吸綜合征病毒(Porcine?Reproductive?and?Respiratory?Syndrome?Virus，PRRSV)、豬圓環(huán)病毒2型（Porcine?Circovirus?Type2，PCV2)和/或豬流感病毒(Swine?Influenza?Virus，SIV)混合感染時(shí)，就會(huì)發(fā)生常見的豬呼吸道疾病綜合征(Porcine?Respiratory?Disease?Complex，PRDC)，不僅可以引起豬的呼吸系統(tǒng)疾病，同時(shí)也會(huì)導(dǎo)致豬的繁殖能力下降。?

豬支原體肺炎是一種頑固性慢性傳染病，藥物治療效果不夠理想，停藥后容易復(fù)發(fā)，該病一旦在豬場(chǎng)流行,就很難根除。因此，預(yù)防、控制和凈化豬支原體肺炎須采取早期診斷、及時(shí)隔離、抗生素治療或淘汰病豬、疫苗預(yù)防、全進(jìn)全出、嚴(yán)格消毒等綜合性措施，其中疫苗預(yù)防在控制豬支原體肺炎中起著關(guān)鍵性的作用。?

盡管目前豬支原體肺炎滅活疫苗已經(jīng)在臨床上進(jìn)行了大規(guī)模的應(yīng)用，但是對(duì)該病的控制效果卻并不盡如人意，且通常情況下，滅活疫苗可以一定程度上降低患病豬肺臟的病變指數(shù)，但并不能有效降低患病豬的比例。豬支原體肺炎因此被?認(rèn)為是流行范圍最廣、最難凈化的豬傳染病之一。這些疫苗效果不佳的原因可能與其滅活疫苗的本質(zhì)以及豬肺炎支原體感染的特性有關(guān)。?

豬肺炎支原體通過呼吸道感染結(jié)合于支氣管纖毛上皮細(xì)胞上形成定殖，從而造成持續(xù)感染。滅活疫苗免疫后激發(fā)全身性免疫應(yīng)答，而誘發(fā)局部免疫應(yīng)答的效力不佳，其產(chǎn)生的循環(huán)抗體必須通過上皮屏障，分泌到氣管支氣管管腔，而該過程異常困難，而且效率低下。為了能夠達(dá)到有效免疫，疫苗必須能夠刺激高水平的系統(tǒng)免疫應(yīng)答。當(dāng)然，這需要相對(duì)較高的抗原劑量和較強(qiáng)的佐劑，這樣就使這些疫苗成本增加價(jià)格昂貴。同時(shí)，滅活疫苗產(chǎn)生的免疫應(yīng)答只能抑制野毒感染后的增殖和減輕組織破壞程度，并不能完全阻止野毒的感染，因而難以達(dá)到對(duì)該病的理想控制。?

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種豬支原體肺炎減毒活疫苗，該豬支原體肺炎減毒活疫苗可用于預(yù)防和控制豬肺炎支原體感染導(dǎo)致的疾病，包括其他病原菌與豬肺炎支原體共同感染導(dǎo)致的疾病。?

豬支原體肺炎減毒活疫苗的作用機(jī)制不同于滅活疫苗，其接種后可在體內(nèi)增殖，有效激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，同時(shí)活疫苗進(jìn)入呼吸系統(tǒng)后可定殖于支氣管纖毛細(xì)胞上，產(chǎn)生“占位效應(yīng)”，使得野毒無(wú)法定殖，從源頭上阻斷野毒的侵染過程，從而起到很好的抗感染作用。同時(shí)，由于活疫苗可以在體內(nèi)增殖，有效激活免疫系統(tǒng)，所需要的劑量遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于滅活疫苗，因此在成本控制上較滅活疫苗有明顯優(yōu)勢(shì)，有利于節(jié)約社會(huì)資源。?

活疫苗研制的關(guān)鍵在于高免疫原性菌株的獲得和致弱過程中使菌株毒力下降同時(shí)保持免疫原性的致弱技術(shù)。?

本發(fā)明根據(jù)毒株的特點(diǎn)，使用前100代乳兔肺繼代，100代以后無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基繼代的致弱方法。該方法的優(yōu)點(diǎn)在于在前期傳代過程中采用動(dòng)物體內(nèi)繼代，可以避免使用培養(yǎng)基體外繼代時(shí)容易導(dǎo)致菌株在早期過快致弱、不利于免疫原性維持的缺陷。后期采用無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)基繼代，有利于一定程度上減少致弱代次，縮短致弱過程。?